【摘 要】
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人血清蛋白质在生物化学领域的各种相互作用中有着重要的意义和作用,因而被广泛研究。为了提高聚丙烯酰胺凝胶电泳后对血清蛋白检测的灵敏度,本文建立了一种新的荧光成像检测
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人血清蛋白质在生物化学领域的各种相互作用中有着重要的意义和作用,因而被广泛研究。为了提高聚丙烯酰胺凝胶电泳后对血清蛋白检测的灵敏度,本文建立了一种新的荧光成像检测方法。将BSA包裹的金纳米簇作为荧光成像的探针对聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的人血清蛋白质进行检测,并使用O2低温等离了体(LTP)处理金纳米簇,达到了增敏荧光成像检测的效果。实验优化了金纳米簇荧光成像体系的pH、成像时间等因素,优化了LTP的载气种类、载气流速、对纳米簇的处理时间等条件,使用优化后的成像条件对电泳蛋白质实现了高灵敏度的荧光成像检测。我们借助等温滴定微量热实验研究了金纳米簇与蛋白之间的相互作用,解释了金纳米簇检测血清蛋白和O2-LTP增敏荧光成像检测的机理。实验表明,金纳米簇荧光成像法和O2-LTP增敏的金纳米簇荧光成像法对血清蛋白检测的灵敏度分别是考染法检测灵敏度的7倍和14倍,一些血清中的中、低丰度蛋白也可以用此荧光成像法检测到。本实验还将金纳米簇荧光成像检测法应用于肝病患者血清样品的分析检测当中,成像结果能够对病人血清与健康人血清进行区分。金纳米簇荧光成像法在血清蛋白质的高灵敏检测方面有一定的优势,在临床分析和蛋白质组学的研究方面也展示出了很大的潜力。 此外,本论文还首次将金溶胶应用于血清蛋白质的成像检测当中。金溶胶本身没有荧光,在与电泳后凝胶巾的蛋白质结合后可以产生非常强的荧光发射,从而实现了对血清的全蛋白检测。金纳米的这项荧光行为只在与凝胶中的蛋白结合后才会产生,在单纯的凝胶中或者在蛋白的溶液体系中都不会导致荧光信号的产生。本文初步对金溶胶检测血清蛋白质的机理进行了讨论和解释。这种荧光成像检测几乎不产生背景,检测灵敏度高,操作简便,重现性极好,为血清蛋白质的电泳后检测提供了新的途径,也为金溶胶的研究开辟了新的思路。
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