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背景:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是老年人较常发生的神经退行性疾病,其病理特点是黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元逐渐丢失,同时出现非多巴胺能神经元变性,目前该病尚无法根治。随着神经干细胞(neural stem cells,NSCs)研究的深入发展,人们期望通过NSCs移植来彻底治愈PD。雌激素(estrogen,E)对神经元的保护作用引起广泛关注,并且已经证实:在NSCs上存在雌激素受体(estrogen receptor,ER);E能促进NSCs增殖,并提高神经元的分化率[1];E可以促进人胚胎NSCs向DA能神经元分化,并提高移植的DA能神经元的存活率[2]。胶质源性神经营养因子(Glial-derived Neurotrophic Factor,GDNF)对DA能神经元具有特异性的营养作用,并且能特异地诱导NSCs定向分化为DA能神经元。但是两者在中脑发育过程中的作用及机制,以及是否存在相关性,还少见报道。为此,我们以体外培养的胎鼠中脑NSCs作为模型,研究人造E-己烯雌酚和GDNF对NSCs增殖分化的影响,为PD的治疗提供理论依据。目的:研究己烯雌酚和GDNF对胎鼠中脑NSCs增殖分化的影响及相关性,为治疗PD提供理论依据。方法:取孕14天的SD(Sprague-Dawley)大鼠胚胎中脑细胞行体外神经元培养,用高(B组:1x10-7 mol·L-1)、中(C组:1x10-8 mol·L-1)、低剂量(D组:1x10-9 mol·L-1)的己烯雌酚改变培养环境,同时设立空白对照组(A组),用免疫组化法检测神经元特异烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)及c-fos蛋白表达量的差异,来确定己烯雌酚对中脑神经元的影响。同法体外培养胎鼠中脑NSCs。实验分三步进行:第一步观察高(ⅠB组:1x10-7 mol·L-1)、中(ⅠC组:1x10-8 mol·L-1)、低剂量(ⅠD组:1x10-9 mol·L-1)的己烯雌酚对NSCs增殖分化的影响,并设空白对照组(ⅠA组),得出影响最显著的剂量。第二步观察低(ⅡB组:10ng/ml)、高剂量(ⅡC组:20ng/ml)的GDNF对NSCs增殖分化的影响,并设空白对照组(ⅡA组),得出影响显著的剂量。第三步观察双因素组(ⅢB组:最适剂量的己烯雌酚+20ng/mlGDNF;ⅢC组:最适剂量的己烯雌酚+10ng/mlGDNF)对NSCs增殖分化的影响,并设空白对照组(ⅢA组)。再用免疫荧光化学法检测nestin,NSE和神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达情况,以此分析己烯雌酚和GDNF在NSCs生长发育中所起的作用,并探讨其可能的机制。结果:己烯雌酚对体外培养的胎鼠中脑神经元具有保护作用,以中等剂量(1x10-8 mol·L-1)效果最为显著;己烯雌酚能促进体外培养的胎鼠中脑NSCs增殖及向神经元方向分化,并能促进突起生长发育,同样以中等剂量(1x10-8 mol·L-1)效果最为显著;高剂量的GDNF(20ng/ml)能促进NSCs增殖分化并提高神经元的分化率;中剂量的己烯雌酚和低剂量的GDNF(1x10-8 mol·L-1己烯雌酚+10ng/mlGDNF)对NSCs增殖分化具有协同作用,能显著提高神经元的分化率。结论:雌激素能促进中脑神经元的生长发育和NSCs的增殖分化,并具有剂量依赖性;雌激素与GDNF在一定条件下对中脑NSCs的增殖分化具有协同作用。