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河豚毒素(Tetrodotoxin简写为TTX)是一种存在于河豚鱼体和其他生物体内海洋性神经毒素,主要的检测方法为HPLC法和小鼠生物法。HPLC法检测TTX,样品的前处理是方法成功的关键。主要涉及提取和纯化过程中的回收率和除杂效果。以往的文献报道中,河豚鱼组织中的TTX经醋酸溶液提取后,首先以吸附性很强的物质来除去提取液中的杂质,然后过截留分子量为1000的超滤膜或Bio-Gel P-2分子筛层析柱去除大分子物质,上阳离子交换树脂2-3遍吸附河豚毒素和部分去除氨基酸和糖类等杂质,酸洗脱液冷冻干燥。最终样品是得到很好的净化,但回收率过低,较难用于HPLC法的TTX定量分析。本次实验对样品的纯化条件进行了优化,对D152型大孔弱酸性阳离子交换树脂洗脱条件和C18固相萃取小柱的净化作用进行了研究,发现5%醋酸洗脱D152型离子交换树脂对肝脏提取液中的总糖(苯酚-浓硫酸法)和氨基酸(茚三酮比色法)去除率分别达到86.4%和62.0%,对TTX的回收率为97.5%。SPE C18柱经pH 3.0的醋酸溶液酸化后,对TTX的回收率达95.3%,RSD为2.16%,并除去了D152型离子交换树脂酸洗脱浓缩液中的色素,经HPLC法验证,TTX峰与周围杂质分离良好,基质大大减少,回收率亦令人满意,达到了预期纯化效果。本次实验我们在国内首次建立以庚烷磺酸钠离子对磷酸缓冲盐为流动相,联合PDA检测的反相高效液相色谱方法定量分析虫纹东方豚肝脏中的河豚毒素。方法:WATERS600E液相系统,PDA996二极管矩阵检测器;色谱柱Hypersil BDS C18(i.d 4.6×250mm 5μm,大连依利特公司);流动相0.05mol/LNaH2PO4:0.05mol/LNa2HPO4=1:1(v/v),庚烷磺酸钠离子对5mmol/L;流速0.6ml/min;检测波长205nm;柱温20℃;进样量20μL。样品处理:肝脏匀浆,用2倍乙酸溶液浸提,提取液煮沸去蛋白和乙醚除脂肪,然后以0.8ml/min流经NH4+D152型阳离子交换树脂,水洗后,用5%HAC洗脱。洗脱液减压浓缩。最后上酸化的