【摘 要】
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随着生命科学和生物工程的快速发展,磁分离技术以其简便而快速的分离应用,适于多样化的样品基质,易自动化和微型化的特性正成为生命科学领域不可缺少的手段。本文以本实验室
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随着生命科学和生物工程的快速发展,磁分离技术以其简便而快速的分离应用,适于多样化的样品基质,易自动化和微型化的特性正成为生命科学领域不可缺少的手段。本文以本实验室采用模板法和化学共沉淀法制备的三种不同基质类型的磁性微球和硅胶为吸附剂,聚乙二醇(PEG)和氯化钠(NaCl)组成的吸附液,研究了小牛胸腺脱氧核糖核酸(DNA)在基于硅醇基的固相载体上的吸附行为。实验结果表明,吸附液组成为20 %(w/v)PEG和2.0 mol/L NaCl和洗脱时间为10 min的条件下,DNA的回收率可达80%。磁性微球的提取效率与硅胶相仿,但是由于省去了离心分离步骤,缩短了核酸模板制备时间,有利于实现自动化操作。为了研究DNA在磁性微球上的吸附机理,我们进一步研究了从PEG和NaCl组成的吸附液中,DNA被吸附至固相载体上的吸附等温线,研究中发现,DNA的吸附可用弗仑德里希吸附模型加以描述,相关系数均可达0.994以上。采用研磨法粉碎哺乳动物组织小牛胸腺和植物组织玉米仁,经细胞裂解液破细胞后,以硅醇基表面的磁性微球为固相载体,进行基因组DNA磁分离提取,得到了片段约20 kb,A260/A280大于1.77的高纯度DNA。将磁性微球用于野生酿酒酵母菌基因组DNA的提取。采用两种不同的方法部分和完全裂解酿酒酵母细胞壁,获得了片段分别为5 kb和20 kb左右,且A260/A280在1.77-1.89之间的DNA片段。对所制备的磁性微球用硅烷化试剂表面改性后,将不同表面官能团的磁性微球用于小牛胸腺、玉米仁和野生酿酒酵母基因组DNA的提取。与硅醇基表面的磁性微球一样,获得了较好的结果。
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