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氯酚类化合物是一类由氯原子取代苯环上氢原子的芳香族化合物。根据苯环上被取代氢原子的数目,氯酚可被分为一氯酚(Monochlorophenol)、二氯酚(Dichlorophen,DCP)、三氯酚(Trichlorophenol,TCP)、四氯酚(Tetrachlorophenol,TeCP)、五氯酚(Pentachlorophenol,PCP)。氯酚极易溶于二甲基亚砜和苯等有机溶剂,难溶或者微溶于水,且其溶水性会随着苯环上氯原子的增多而降低。现在被广泛用于杀虫剂、防真菌剂、除草剂和防腐剂等。因此,在环境中氯酚类物质极易通过生物链的传递进入人体。目前,多个国家已经将多种氯酚列入污染物优先控制名单。氯酚类化合物的结构稳定,一旦进入环境,很难被降解,属于持久性有机环境污染物。其中,2,4,6-三氯酚是一种毒性较强的氯酚,被世界卫生组织定义为致癌物质。由于其分布的广泛性与其难降解的特点,因此关于其危害的研究具有重要的现实意义。本研究探讨的是2,4,6-三氯酚处理小鼠成纤维细胞后,对其造成的影响,为预防其毒性提供一定的借鉴和参考。本实验研究结果如下:1.经过2,4,6-三氯酚处理12 h的小鼠成纤维细胞(Murine Fibroblast Cell,MEF)的细胞活力会降低并且细胞形状会改变。0.25、0.5、0.75、1.0 mM的2,4,6-三氯酚处理后,随着浓度的升高,细胞活力呈递减现象,并且1.0 mM的2,4,6-三氯酚处理细胞后会明显改变细胞的形状。2.被处理过的小鼠成纤维细胞会发生氧化应激反应。细胞经处理1 h后,ROS达到一个爆发点,1~2 h,ROS降到最低,2~4 h时,ROS达到第二次爆发水平,之后ROS的水平下降。本研究选取了两个指标来检测ROS水平,分别是Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA的水平,HO-1 mRNA和Nfr-2 mRNA的水平在经过2,4,6-三氯酚的处理后会增加,且随着2,4,6-三氯酚浓度的增加而增加的同时发现经过处理后的细胞其Nrf2蛋白焦点会增加。3.经2,4,6-三氯酚处理过的小鼠成纤维细胞会诱导内质网应激途径。细胞经过2,4,6-三氯酚处理12 h后,IRE1α,Bip和剪接型的XBP1 RNA表达量会明显升高。全长型的XBP1会随着浓度的升高转换成剪接型的比值也会增加。为了进一步证实2,4,6-三氯酚会诱导内质网应激的发生,本研究检测了内质网应激的标志蛋白Bip和CHOP,可以看到其表达量都会随着2,4,6-三氯酚浓度的增加而升高。同时磷酸化的eIF2α在浓度为0.5和0.75 m M时达到最大值。4.细胞在经过2,4,6-三氯酚的药物暴露后会发生凋亡。细胞经过2,4,6-三氯酚暴露后,利用流式细胞术对细胞的凋亡作了定量分析。细胞凋亡的比例随着2,4,6-三氯酚浓度的增加而增加。与此同时本研究也检测了反应凋亡的其他指标。经过处理的细胞,其caspase的活性随着时间的延长而增加,并且在12 h处达到最高。检测了线粒体的膜电位,线粒体膜电位是反应凋亡的一个重要指标,可以发现在浓度为1.0 mM时,线粒体膜电位降到最低。同时Bax/Bcl-2比值越高意味着凋亡发生的程度越大。结论:2,4,6-三氯酚处理细胞后会造成细胞活力降低,同时引发氧化应激,内质网应激以及细胞凋亡。