阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、菌血症、小肠结肠炎，并可能引起神经功能紊乱，造成严重的后遗症，死亡率高达20％～50％以上，引起世界范围内的广泛关注。通过研究发现婴儿配方奶粉是其主要的感染源。传统方法(FDA推荐)操作繁琐，检测时间长，且灵敏度较低。本研究利用荧光定量PCR技术建立了一套从婴儿配方奶粉中快速检出阪崎肠杆菌的方法，缩短了阪崎肠杆菌的检测时间，提高了灵敏度。本研究以阪崎肠杆菌的16S rRNA基因为靶基因，选择特异性引物和探针，经过普通PCR扩增后，将PCR产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳，产物胶回收纯化后连接到pMD18-T载体上，并转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中，对阳性克隆进行了筛选鉴定，构建了目的重组质粒，作为标准品绘制标准曲线。并对插入的外源基因进行了测序，与文献报道的序列相似性达到100％，从而证实PCR扩增产物确为目的扩增产物。本研究还用相同的方法设计并构建了内标重组质粒和内标探针，它与目的基因在同一反应体系内同时扩增。构建的内标重组质粒可以得到较好的扩增曲线和Ct值，可以避免假阴性的产生，确保实验的可靠性。对PCR反应体系中退火温度、引物探针配比、内标浓度进行了优化，以确定适宜PCR反应体系和PCR扩增程序。适宜反应体系为：12.5μL Premix Ex Taq(2×)，上、下游引物(各10μM)各0.5μL，1μL目的探针(3μM)，1μL内标探针(3μM)，1μL．内标重组质粒DNA(10~4 copies／μL)，1μL目的重组质粒DNA，8μL灭菌双蒸水，总反应体系25μL；适宜扩增程序为：95℃预变性10S，再按94℃5S—60℃20S进行45个循环。本研究共检测了15株菌，4株阪崎肠杆菌中均为阳性结果；11株其它肠杆菌均为阴性结果。因此本研究用到的引物、探针特异性较强。结合mLST-BHI两步法增菌，比较了3种从婴儿配方奶粉中提取阪崎肠杆菌DNA的方法，结果表明试剂盒法可从样品中高效提取阪崎肠杆菌DNA作为模板进行检测，且无论检测时间及灵敏度均明显优于其他方法。本方法纯菌培养物检测灵敏度可以达到8.624拷贝／μL，2.7CFU／mL；人工污染检测限可以达到14.117拷贝／μL，3.5cfu／100g婴儿配方奶粉，并且使检测可以在1个工作日内完成，大大缩短了检测时间。对实际样品进行检测，将荧光定量PCR方法与行业标准SN／T 1632.1-2005方法进行比较，确定荧光定量PCR方法敏感性为100％；特异性为99.0％；符合率为99.0％。