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中药原料质量差异大是造成中成药质量差异的重要原因,因此,中药生产投料前控制原料药的质量均一有助于提高中药成品的质量一致性。课题组前期在行业专项“中成药生产投料饮片质量均一性控制技术研究”(课题编号:201307009)基础上对复方丹参制剂等处方原料进行了质量均一化研究,形成了中药生产饮片投料前多指标成分质量均一性控制方法和中药多指标成分均一化计算软件,本课题在前期工作的基础上,选择复方丹参片等4个上市中成药为模式药物,采用药效实验-变量投影分析的方法确定与“效”相关的控制质量均一性指标成分,采用量效关系研究方法确定该指标成分的“量”控范围;为便于对质量均一性的评价和便于生产应用,开发了包括能处理中药指纹图谱指纹成分质量均一化智能分析软件系统并在中药产品实际生产中应用验证,证明所建立的方法体系可行,同时形成了中药质量均一化控制策略和操作规范。目的:建立中成药质量均一性控制策略和方法体系;开发中药饮片生产投料指纹图谱及成分智能均一化分析软件系统;为加强中成药质量均一性控制、保障中成药疗效的稳定发挥,提供可借鉴的方法。方法和结果:1、复方丹参片等模式药物拟定多指标成分的检测方法研究(1)采用高效液相法建立了复方丹参片中丹参和三七饮片及成品中丹酚酸B、丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1含量测定方法,结果证明:建立的检测方法准确可靠,能够用于复方丹参片质量均一性评价指标的检测;下面照此改!(2)采用高效液相法建立虎力散片制草乌和三七饮片及成品中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱以及人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1含量检测方法,结果建立的检测方法准确可靠,能够作为虎力片质量均一性评价检测指标;(3)采用高效液相法建立穿王消炎胶囊穿心莲饮片和了哥王饮片及成品中新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和西瑞香素含量检测方法,采用高效液相法建立穿心莲饮片和了哥王饮片及成品指纹图谱检测方法,结果建立的检测方法准确可靠,能够作为穿王消炎胶囊质量均一性评价检测指标;(4)采用高效液相法建立前列舒乐胶囊淫羊藿饮片和黄芪饮片及成品中朝藿定C、淫羊藿苷、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮含量检测方法,采用高效液相法建立淫羊藿饮片和黄芪饮片及成品指纹图谱检测方法,结果表明,建立的检测方法准确可靠,能够作为前列舒乐胶囊质量均一性评价检测指标;2、变量重要性投影分析法(DPVPH)用于丹参饮片质量差异对复方丹参片药效影响的分析研究(1)通过含药血清体外缺氧/复氧CMEC研究复方丹参中丹参饮片---所有“饮片”均改为“饮片”质量差异及丹参饮片用量对药效的影响,并应用DPVPH和Hill方程法分析复方丹参片中丹参质量与药效关系和指标成分含量阈值,结果表明,丹参的质量差异对复方丹参片体外缺氧/复氧CMEC的药效影响显著,随着丹参质量和用量的提高,体外缺氧/复氧CMEC的细胞活力呈提高趋势,NO和ET呈降低趋势;DPVPH法分析得出,丹酚酸B影响最大的药效指标是SOD,丹参酮影响最大的药效指标是NO;Hill方程法分析得出,复方丹参片中丹酚酸B ED50=13.15 mg/片,[ED]20～[ED]80=9.85～18.93mg/片,经平均转移率推算出丹参饮片中丹酚酸B含量为:44.65mg/g,含量控制范围为:33.45～64.28mg/g,偏差控制为-25%～+43.9%;复方丹参片中丹参酮ⅡAED50=0.88mg/片,[ED]20～[ED]80=0.76～0.99mg/片,丹参饮片中丹参酮ⅡA含量为:8.89mmg/g,含量控制范围为:7.64～9.96mg/g,偏差控制为-13.6%～+12.5%。(2)通过大鼠体内血瘀模型研究复方丹参片中丹参质量差异及丹参用量对大鼠体内血瘀模型血液流变学和药效学指标的影响,并应用DPVPH和Hill方程法分析复方丹参片中丹参饮片质量与药效关系和指标成分含量阈值,结果表明,丹参饮片的质量差异对复方丹参成品在大鼠体内血管内皮细胞的药效影响显著,随着丹参饮片质量和用量的提高,各药效指标均有明显改善趋势;DPVPH法分析得出,丹酚酸B影响最大的药效指标是60S-1,丹参酮影响最大的药效指标是循环内皮细胞数量;Hill方程法分析得出,复方丹参片中丹酚酸B ED50=10.36 mg/片,[ED]20～[ED]80=8.82～16.58 mg/片,经平均转移率,推算出丹参饮片中丹酚酸B含量为:35.18mg/g,含量偏差范围为:29.95～56.30mg/g,偏差控制为+15%～-0.60%;复方丹参片中丹参酮 ⅡAED50=0.77 mg/片,[ED]20～[ED]80=0.56～0.86mg/片,丹参饮片中丹参酮ⅡA含量为:7.75mg/g,含量控制范围为:5.64～8.66mg/g,偏差控制为-27.2%～+11.7%。3、根据中药饮片生产投料要求和工艺特点,编辑一套用于饮片投料均一化智能分析软件系统,该软件包含指纹图谱叠加显示模块、融合指纹图谱生成和显示模块、均值指纹图谱生成和显示模块、指纹图谱相似度分析模块、指纹图谱成份峰分析模块以及智能并行调配优化模块,通过软件编程,已实现了各模块功能,成功开发了一套中药饮片生产投料均一化智能分析软件,该软件可用于中药生产投料饮片质量均一化调配方案的计算,降低中药生产成品的批间差异。4、将研究建立的智能分析软件应用于模式药物实际生产中,结果如下:(1)对复方丹参片丹参饮片和三七饮片均一化投料,其成品中丹酚酸B、丹参酮 ⅡA、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1含量批间差异RSD值小于7%,而未均一化产品含量测定RSD值大于10%,最高达到34.87%;(2)对虎力片制草乌饮片和三七饮片均一化投料,其成品中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱含量批间差异RSD值小于3%,而未均一化产品含量测定RSD值大于9%,最高达到11.43%;(3)对穿王消炎胶囊穿心莲饮片和了哥王饮片均一化投料,其成品中新穿心莲内酯含量RSD为6.80%,脱水穿心莲内酯含量RSD为6.78%,西瑞香素含量RSD为5.12%,均一性远高于市售品种(新穿心莲内酯含量RSD 20.01%,脱水穿心莲内酯含量RSD 25.12%,西瑞香素含量RSD 40.58%);同时,均一化投料饮片后,成品指纹图谱相似度均在0.985以上,而市售产品相似度在0.792～0.937之间。(4)对前列舒乐胶囊淫羊藿饮片和黄芪饮片均一化投料,其成品中朝藿定C、淫羊藿苷、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮各成分含量RSD依次为6.84%、2.20%、4.59%、8.81%,而未均一化的市售产品朝藿定C、淫羊藿苷、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮各成分含量RSD依次为34.02%、23.88%、10.80%、16.51%;另外,市售前列舒乐胶囊指纹图谱相似度在0.880～0.963之间,均一化产品相似度在0.962～0.992之间,相似度大大提高,表明均一化投料后产品质量一致性明显提高。结论:本文应用体内外药效实验证实了中成药原料饮片质量差异对成品质量及药效有显著影响,提示保证原料饮片质量均一性是保障成品质量均一性的重要因素;通过建立设计制作了中药饮片生产投料均一化智能分析软件系统,该软件系统具备中药指纹图谱分析,指标成分和指纹图谱成分均一化分析,经生产验证,可应用于中药生产实际操作。