神经肽S(neuropeptide S, NPS)是2002年发现的一种神经肽,由20个氨基酸组成,通过激活其受体NPSR而发挥作用,因其氨基端残基在所有已测定动物均为丝氨酸(serine, S),故Reinscheid RK等人将其命名为神经肽S(NPS)。NPS及其受体主要分布于中枢神经系统,外周器官也有少量分布。NPS/NPSR系统参与调节广泛的生理功能,包括唤醒、觉醒、焦虑、摄食、巨噬细胞免疫应答和氧化损伤等。目前在大鼠和小鼠有关NPS的研究报道较多,但未见有关兔NPS及其受体基因克隆和组织表达的报道。因此本文用RT-PCR方法开展了这方面的研究,克隆了兔NPS及其受体基因,研究了其组织分布,并探讨了热应激对兔下丘脑-垂体-肾上腺轴NPS及其受体mRNA表达的影响。结果如下：1利用同源克隆方法首次从兔脑组织中克隆得到NPS基因的全长编码序列(CDS)及NPSR部分CDS序列。兔NPS基因长为270bp,NPSR基因长为847bp,并将它们登录在Genebank上,基因登录号分别为EU978456和FJ713102。兔NPS前体基因与黑猩猩、九带犰狳、人和马NPS前体基因氨基酸同源性较高,分别为76.7%、75.6%、75.6%和75.6%。兔NPS前体基因与大鼠、牛、小鼠、狗、负鼠、鸡、豚鼠、鼩鼱、猕猴和加氏大婴猴氨基酸序列同源性在52.2%一71.1%之间。NPS基本上是保守的,在NPS基因前半部分在不同物种之间存在一定差异。对14个物种比对显示NPS前体在进化过程中相对保守,只是在不同物种进化分支之间存在着局部差异,符合种属间的进化亲缘关系。2用RT-PCR方法对兔体内NPS及NPSR基因的表达进行了研究,结果显示,NPS及NPSR mRNA在兔脑桥、下丘脑、垂体、脑干、脊髓、胃、胆囊、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫、卵巢、主动脉、胰、唾液腺、甲状腺、胸腺和乳腺等组织器官中均有表达,主要在中枢神经系统表达,在外周组织器官低水平表达,该结果与在大鼠上获得的结果基本相似。3用相对定量RT-PCR方法,对24只新西兰白兔在热应激条件下(42℃,对照组、0.5h、1h和2h,n=6)下丘脑-垂体-肾上腺NPS及NPSR mRNA表达的变化规律进行了研究。结果如下新西兰白兔在热应激条件下NPS及NPSR mRNA在下丘脑、垂体和肾上腺均有表达,但具有不同的表达模式。热应激后NPS mRNA在下丘脑表达水平逐渐升高,1h时表达丰度最高,与对照组差异极显著(P<0.01),随后2h组下降。热应激后NPS mRNA在肾上腺0.5h组达到最高,与对照组差异极显著(P<0.01),随后呈下降趋势。热应激后NPS mRNA在垂体具有不同的表达模式,实验组均呈下降趋势,且与对照组差异均为极显著(P<0.01)。NPSR mRNA与NPS在下丘脑垂体肾上腺的表达模式趋于一致。以上结果表明兔NPS及其受体基因在进化上是保守的；热应激时NPS及其受体基因在HPA轴上的表达发生变化,提示NPS系统可能在热应激中发挥一定的生理作用,其实验结果为研究兔NPS系统的生理功能提供了实验资料。