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本试验通过对上海地区四个区县猪场的大肠杆菌和沙门氏菌进行耐药监测,不仅可以掌握耐药菌株和耐药基因的分布与变化趋势,探明耐药菌和耐药基因的演变机制与传播模式,对上海地区建立统一、规范的监测标准提供资料和依据,而且可以指导本地区的养殖业主的合理使用抗菌药物,减少抗菌药物耐药性的传播,确定遏制细菌耐药性传播措施的可靠性和有效性,帮助有关研究机构和制药公司有目的地开发新的抗菌药。1大肠杆菌和沙门氏菌的分离培养与鉴定对从猪场采集的粪便样品通过选择性培养基选择培养,TSI试验及细菌自动鉴定仪进行鉴定,结果表明：414个样品中分离鉴定出371株大肠杆菌,35株沙门氏菌,分离率分别为为89.6%,10.9%。大肠杆菌的分离率显著高于沙门氏菌。2大肠杆菌和沙门氏菌的耐药性分析猪场分离的大肠杆菌和沙门氏菌对13种养殖业中常用的抗菌药物的进行耐药性的研究,耐药结果表明：大肠杆菌对氨苄西林、大观霉素、复方新诺明、强力霉素、四环素、磺胺异嗯唑耐药率较高,最低的耐药率也达到了74.7%。大肠杆菌的多重耐药率达到了95.82%,大部分集中在6-10种抗菌药物的耐药；沙门氏菌对氟苯尼考耐药率较高,但对多粘菌素E则较为敏感,其中对多粘菌素E的耐药率仅为11.4%。3实时荧光定量PCR对产ESBLs的大肠杆菌基因型的检测方法的建立采用临床和实验室标准化研究所(CLSI)推荐的ESBLs初筛、确证试验方法(微量肉汤稀释法),对从上述实验分离到的大肠杆菌进行ESBLs的检测,通过NCBI上公布的ESBLs的四个基因型TEM、CTX-M、SHV、OXA的序列设计荧光探针的引物,建立起一种快速检测ESBLs的荧光定量PCR的方法。结果显示,选择0.5μmol/L作为最佳引物浓度,选择0.1μmol/L作为探针的最佳浓度。在重复性试验中四个基因型的五个不同稀释浓度的变异系数均为超过1.5%,说明重复性较好。本试验的扩增检测限为101拷贝/μ/L,远远高于普通PCR的10~4拷贝/μ/L,标准曲线的线性相关系数R~2>0.99。本试验可用ESBLs四个基因型的检测。4沙门氏菌分子分型的研究应用Ribo-PrinterMicrobial Characterization System(RP)PVU Ⅱ对上述分离得到的35株沙门菌进行DNA指纹图谱的测定,并且统计实验菌株相互之间的相似性关系。35株沙门氏菌中,检测出1株猪霍乱沙门氏菌,1株阿格纳沙门氏菌,检测率分别为2.9%,分别只有一个RP型；15株肠炎沙门氏菌,检测率为42.9%,被分成5个RP型；18株鼠伤寒沙门氏菌,检测率分别为51.4%被分为6个RP型。