冬枣环磷酸腺苷提取纯化工艺研究

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本文优化了冬枣中环磷酸腺苷高效液相色谱测定的色谱条件:色谱柱为Hypersil-ODS2 C18柱(25cm×4.6mm,5μm),流动相为V(甲醇):V(0.05mol/L磷酸二氢钾)=10:90,流速1.0mL/min,紫外检测器UV25.0nm×0.2AUFS,柱温30℃,进样量15μL。测定结果表明:标准曲线在1.0~50.0μg/mL,范围内线性良好,加标回收率为100.04%,CV为0.89%(n=6)。利用所优化的色谱条件检测6种冬枣中cAMP的含量,结果表明,鲁北冬枣的含量最高,为139.10μg/g枣粉。其生长发育期的动态检测表明,cAMP含量呈现上升趋势,至充分成熟时达到最高。 根据环磷酸腺苷的溶解特性,选取水、乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、浓度30%~70%的乙醇溶液、pH值3.0~8.0的缓冲溶液进行常规浸提,最终选取水为提取溶剂。在此基础上,考察了超声波和微波辅助提取的效果并确立了最优化工艺条件,试验证明这两种措施的提取率都明显高于常规浸提。常规浸提方法的提取率为139.10μg/g枣粉;超声波辅助提取的最优化工艺条件为:料液比1:12、浸泡时间12h、处理温度40℃、处理时间15min,提取率为301.25μg/g枣粉;微波辅助提取的最优化工艺条件为:料液比1:25、微波功率200W、浸泡时间4h、处理时间3min、,提取率为241.37μg/g枣粉。 选择大孔吸附树脂进行提取液的纯化,根据饱和吸附试验的结果确定采用HPD-400型树脂。考察了其静态吸附与解吸动力学特性,得到了吸附动力学曲线、吸附等温线和解吸动力学曲线。在此基础上进行了动态吸附解吸试验,确定在床层体积为10mL(φ1.0cm)的情况下,上样液浓度为50.0μg/mL,适宜pH值为4.0~5.0,流速为4BV/h,流出液体积达到12BV时吸附饱和。选择30%乙醇溶液为适宜的洗脱液,洗脱流速2BV/h,根据洗脱曲线,收集流出液体积1BV~12BV之间的洗脱液,进行浓缩蒸干。经纯度检测,纯化后cAMP的纯度从0.109%增加到32.453%,达到了对提取液进行纯化的目的。
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