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目的:肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种病因所致慢性肾脏病(chronic kidney diseases,CKD)发生发展的共同病理表现,是发展至终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的关键过程。肾间质纤维化的病理过程包括肾小管间质纤维化和晚期的肾小球硬化,表现为炎症细胞浸润、细胞因子激活,肾小管上皮间充质转分化,成纤维细胞增殖,细胞外基质沉积,细胞凋亡,最终导致终末期肾衰竭。随着对CKD研究的不断发展,发现许多细胞因子和生长因子与CKD的病理生理过程有关,如转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1),基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP),瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)等,不同程度的参与了CKD的发病过程。而JAK/STAT(The Janus kinase family/signal transducers and activators of transcription)通路是一条由多种细胞因子和生长因子介导的信号转导通路,对疾病的发生发展有重要的调控作用,其激活能促进各种疾病的进展,如淋巴瘤、白血病及各种炎症性疾病。已有研究表明,JAK/STAT信号通路与糖尿病肾病、梗阻性肾病、多囊肾等肾脏疾病的病理生理过程有着密切的联系。已证明,JAK/STAT信号通路与炎症的进展关系密切,既可以调控自身下游炎症相关基因的表达,又可通过参与不同的信号通路发挥其生物学功能,如转化生长因子β(TGF-β)和核因子κB(NF-κB)等通路。同时,巨噬细胞通过JAK/STAT通路的信号转导作用可诱导多种炎症因子的激活。因此JAK/STAT信号通路对机体炎症反应过程的调节作用尤为关键。白三烯(Leukotrienes,LTs)是一类拥有高度生物活性的炎症介质,在体内由炎性细胞产生,与其相关的受体也是重要的炎症介质,大量存在于炎性细胞颗粒蛋白中。目前研究发现,多种病理因素刺激可诱导LTs在肾脏中的表达增强,从而在肾损害中发挥重要作用。因此,抑制LTs的过度表达可能对肾脏病的治疗起到有益的作用。孟鲁司特(montelukast,MON,商品名:顺尔宁)是一种高选择性半胱氨酰白三烯(Cys-LT)受体拮抗剂,在临床作为预防和治疗哮喘的一种非激素类抗炎药物被推广应用。本实验的目的是观察白三烯受体拮抗剂是否可延缓单侧输尿管梗阻(unilateralureteralocclusion,uuo)大鼠肾间质纤维化的进展,及其对uuo大鼠jak2,stat3,il-6及Ⅲ型胶原蛋白表达的影响,探究其是否通过jak/stat信号通路发挥抗肾间质纤维化作用,为肾间质纤维化的临床治疗提供新的理论基础及治疗靶点。方法:采用单侧输尿管梗阻模型,54只清洁级sd大鼠(雄性210±20g),随机分为a、b、c三组,假手术组(a组,sham组)18只,模型组(单侧输尿管结扎组,b组,uuo组)18只,治疗组(孟鲁司特干预组,c组,mon组)18只,适应性喂养7天,按分组不同建立单侧输尿管梗阻模型。各组大鼠均于术前24小时开始给药,治疗组每天给予孟鲁司特10mg/kg/d灌胃,同时sham组和uuo组给以等容生理盐水灌胃。自由进食饮水,分别于术后3、7、14天,每组各取6只大鼠,取左肾组织后处死,用0.9%的生理盐水反复冲洗,取中间1/4组织块于多聚甲醛中固定,用于病理切片,进行he、masson染色及免疫组织化学染色,其余肾组织放于液氮中迅速冷冻,以防止蛋白降解,并保存于-80℃冰箱中,行westernblot实验。使用spss20.0统计分析软件对所得的实验数据进行统计学分析,以均数±标准差(x±s)表示统计结果,使用单因素方差分析对数据进行分析,p<0.05表示结果有统计学意义。结果:1肾脏组织病理学染色1.1光镜下he染色:a组:第3、7、14天,肾小球、肾小管及间质未见明显异常。b组:术后3天,肾小管发生轻度扩张,间质中可见少量炎症细胞浸润;术后7天肾小管管腔扩张程度和间质炎症细胞浸润程度加重,肾小管上皮细胞脱落,空泡样变性;术后14天可观察到大量肾小管萎缩,肾小管基底膜增厚,皱缩,失去正常结构。c组:与同时期b组相比,病变程度较轻,但仍明显重于a组。1.2光镜下masson染色:a组:第3、7、14天肾小球、肾小管及间质未见异常。b组:肾小管广泛扩张,肾间质较前增宽,可见胶原纤维沉积,随梗阻时间的延长,胶原纤维逐渐向肾小管周围延伸,交织成网状“结构”。c组:与同期b组相比,肾间质胶原纤维沉积程度减轻,但仍明显重于a组。2肾组织免疫组织化学染色2.1p-jak2a组:肾小管上皮细胞胞浆p-jak2散在表达。b组:大鼠肾小管上皮细胞胞浆内阳性表达显著增加。随着梗阻时间的延长,其表达水平呈进行性增高,且与a组同时期相比均有统计学意义(p均<0.05)。c组:p-jak2表达水平与同时期b组相比均有显著下降(p均<0.05),但仍高于同时期a组中的表达水平(p均<0.05)。2.2p-stat3a组:在肾小管上皮细胞核几乎不表达。b组:与a组相比,p-stat3在大鼠肾小管上皮细胞核内表达增加。随着病变时间的延长,肾小管上皮细胞核中出现表达逐渐增加。与a组同时期相比均有统计学意义(p均<0.05)。c组:术后第3、7、14天,与同时期b组相比,肾小管上皮细胞核表达水平降低(p均<0.05)。但与a组同时期相比,表达水平均较高(p均<0.05)。2.3il-6a组:肾小管上皮细胞胞浆中微量表达。b组:细胞胞浆中阳性表达明显增加,随着病变的进展,表达水平持续增加,与同一时期a组相比均有统计学差异(p均<0.05)。c组:与同时期b组相比,术后第3、7、14天,il-6表达水平明显下降(p均<0.05);但与a组同时期相比,表达水平均高于a组(p均<0.05)。2.4Ⅲ型胶原a组:正常情况下Ⅲ型胶原在肾小球系膜细胞胞浆、肾小管上皮细胞以及间质细胞中有少量表达。b组:肾小管上皮细胞表达水平增加,肾间质表达不明显,随梗阻时间延长表达增加(p均<0.05)。且表达水平均高于同时期a组(p均<0.05)。c组:Ⅲ型胶原表达水平与同时期b组相比均有显著下降(p均<0.05),但仍高于同时期a组中的表达水平(p均<0.05)。3肾组织中p-jak2、p-stat3westernblot结果p-jak2蛋白:b组术后3、7、14天p-jak2蛋白的表达量逐渐增加(P均<0.05),与同期A组相比,表达量均增加(P均<0.05);C组术后各时期P-JAK2蛋白表达量随梗阻时间延长逐渐增加(P均<0.05),与同时相B组相比较表达量减少(P均<0.05),但仍高于同时相A组(P均<0.05)。P-STAT3蛋白:与同期A组相比,B组和C组术后3、7、14天目的蛋白的表达量均增加(P均<0.05),并随梗阻时间的延长表达量逐渐增加(P均<0.05),C组术后各时期P-STAT3蛋白表达量随时间延长逐渐增加(P均<0.05),与同时相B组相比较表达量减少(P均<0.05),但仍高于同时相A组(P均<0.05)。结论:1 JAK2/STAT3信号通路可能参与了UUO大鼠模型肾间质纤维化的进展。2在UUO大鼠模型中,白三烯受体拮抗剂可能具有抗纤维化作用,其机制可能是通过降低炎症因子的表达,从而抑制JAK2/STAT3信号通路的激活而实现的。