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目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部恶性肿瘤中一种最常见的侵袭性肿瘤,好发于舌、颊、颌骨和牙龈等部位。其恶性程度高、局部浸润强、易发生颈部及远处淋巴结转移。目前手术仍为主要治疗方式,但大多数患者术后易复发,预后差,死亡率高。因此探索OSCC潜在的分子机制和寻找新的治疗靶点是非常重要的。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种没有编码蛋白能力的RNA,其长度大于200 nt,广泛存在于人类基因组内,常定位于细胞浆内或核内。到目前为止,已有多种lncRNA能够通过调控细胞增殖、周期、凋亡和转移等生物学行为,参与癌症的发生和发展。除此之外,lncRNA在OSCC的发生发展过程中起到了至关重要的作用。研究报道RUNX1是RUNX转录因子家族的重要成员之一,可以调控肿瘤细胞的血管形成、迁移、侵袭等生物学行为。LncRNA RUNX1-IT1是RUNX1的内含子转录本1,位于染色体21q22.12区域。目前lncRNA RUNX1-IT1在胃癌和结直肠癌中发挥调控作用,然而lncRNA RUNX1-IT1在OSCC中的表达情况及具体机制尚未见报道。本研究拟通过检测lncRNA RUNX1-IT1在OSCC组织和细胞系CAL27、SCC25中的表达,并分析lncRNA RUNX1-IT1的表达水平与OSCC患者临床病理资料的关系,进一步的体外功能实验探索lncRNA RUNX1-IT1对CAL27细胞生物学行为的影响和可能的机制。研究方法:(1)收集47例OSCC患者癌组织和癌旁正常组织标本。(2)人口腔鳞癌细胞系(CAL27和SCC25)和正常角质细胞系HaCaT的培养。(3)应用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测lncRNA RUNX1-IT1在47例OSCC组织和细胞系(CAL27和SCC25)中的表达。非参数检验分析lncRNA RUNX1-IT1的表达水平和临床病理资料的关系。(4)将lncRNA RUNX1-IT1的过表达和沉默载体分别转染CAL27细胞。(5)CCK8检测CAL27细胞增殖的变化。(6)流式细胞术检测CAL27细胞周期以及细胞凋亡的情况。(7)Transwell检测CAL27细胞迁移的变化。(8)分别采用qRT-PCR和Western Blot方法检测CAL27细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物m RNA和蛋白的表达水平(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin),以反映lncRNA RUNX1-IT1对CAL27细胞EMT的影响。Western Blot方法检测CAL27细胞中PCNA、Cyclin D1和MMP2蛋白的水平。结果:(1)QRT-PCR结果显示:lncRNA RUNX1-IT1在OSCC组织和细胞系(CAL27和SCC25)中的表达水平与癌旁正常组织(P<0.001)和正常角质细胞系(P<0.01)相比显著增高。非参数检验分析发现lncRNA RUNX1-IT1的相对表达水平和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。(2)转染lncRNA RUNX1-IT1过表达和沉默载体后,CAL27细胞中lncRNA RUNX1-IT1的表达水平显著增高(P<0.01)和降低(P<0.01)。(3)过表达的lncRNA RUNX1-IT1促进CAL27细胞的增殖(P<0.05)和迁移(P<0.01),沉默的lncRNA RUNX1-IT1抑制CAL27细胞的增殖(P<0.05)和迁移(P<0.01)。(4)LncRNA RUNX1-IT1的过表达促进CAL27细胞周期从G1期向S期分化(P<0.05),抑制细胞凋亡(P<0.01),而lncRNA RUNX1-IT1的沉默使CAL27细胞周期阻滞于G1期(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.01)。(5)QRT-PCR和Western Blot结果显示:在CAL27细胞中过表达lncRNA RUNX1-IT1后,与对照组相比,实验组E-cadherin的mRNA和蛋白水平均显著下调;N-cadherin、β-catenin、Vimentin的mRNA和蛋白水平均显著上调,促进了EMT;沉默lncRNA RUNX1-IT1后,结果与之相反,EMT发生了逆转。此外,PCNA、Cyclin D1和MMP2的蛋白水平均在lncRNA RUNX1-IT1过表达后显著上调(P<0.01),在lncRNA RUNX1-IT1沉默后显著下调(P<0.01)。结论:(1)LncRNA RUNX1-IT1在OSCC组织和细胞系CAL27、SCC25中显著高表达,且lncRNA RUNX1-IT1的表达水平和淋巴结转移显著相关。(2)过表达的lncRNA RUNX1-IT1促进CAL27细胞的增殖、加快细胞周期从G1期向S期分化、抑制细胞的凋亡;过表达的lncRNA RUNX1-IT1促进CAL27细胞的迁移并且诱导EMT的发生。