乳源抗菌—免疫调节融合肽对人卵巢癌细胞的影响

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目的探讨乳源抗菌-免疫调节融合肽(antibacterial-immunomodulating fusionpeptide,AIFP)对卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响,探究其可能的分子机制,并初步研究其抗菌活性。方法免疫荧光染色鉴定原代培养细胞的纯度;MTT法检测AIFP对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞技术检测AIFP对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响;RT-PCR和Western Blot检测AIFP对卵巢癌细胞Akt、CDC25C、cyclinB1、bax和Bcl-xl基因和相关蛋白表达水平影响;细菌生长曲线的绘制和纸片琼脂糖扩散法检测AIFP的抗菌活性。结果免疫荧光鉴定原代卵巢癌细胞细胞纯度的鉴定结果显示,原代卵巢癌细胞的纯度可达84.61%,可以进行下一步实验。MTT法显示,AIFP作用于SKOV3细胞24、48和72h的ID50分为2.75×10-4mg/ml、3.96×10-5mg/ml和3.96×10-6mg/ml,与对阴性照组相比较,具有时间和剂量依赖性,流式细胞技术结果显示:AIFP的浓度为5×10-3mg/ml,作用于原代卵巢癌细胞24、48和72h的凋亡率分别可达6.10%、19.31%和40.63%,与阴性对照组相比较差异用统计学意义(p<0.05)。AIFP的浓度为×10-3mg/ml,作用于SKOV3细胞24、48和72h的凋亡率分别可为2.82%、7.82%和29.81%,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。用5×10-3mg/mlAIFP作用于SKOV3细胞24、48和72h后G2/M期延长(分别为7.15%、8.81%、12.00%)与空白对照组(2.32%、2.93%、3.02%)比较差异有统计学意义,用5×10-6mg/ml AIFP作用于SKOV3细胞24、48和72h后,G2/M期延长(分别为5.25%、6.90%、8.14%),与空白对照组(2.32%、2.93%、3.02%)比较差异有统计学意义。PCR实验显示,AIFP作用于卵巢癌细胞后,Akt、CDC25C、cyclinB1、BcL-xl基因的表达水平下调, Bax的表达水平上调,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot实验结果显示,Akt、CDC25C、cyclinB1和BcL-xl蛋白表达水平上升,Bax蛋白表达水平下降的,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AIFP组大肠杆菌生长曲线的稳定区段位于对照组的下方,表明细菌生长受到抑制。纸片琼脂糖扩散实验中,AIFP组出现抑菌环,抑菌环的直径小于氨苄青霉素组,但明显大于空白对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、成功培养了原代卵巢癌细胞,经鉴定其纯度可以进行下一步实验。2、AIFP能够抑制原代卵巢癌细胞和SKOV3细胞株的增殖。3、AIFP能够促进卵巢癌细胞的凋亡。4、AIFP对卵巢癌细胞周期的影响表现在其可以将卵巢癌细胞周期阻止在G2/M期5、AIFP可以下调卵巢癌细胞Akt、CDC25C、cyclinB1、BcL-xl基因及蛋白的表达水平,上调Bax基因及蛋白的表达水平。6、AIFP影响大肠杆菌的生长曲线,对大肠杆菌有一定的抗菌作用。
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