【摘 要】
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背景:胰腺癌被称为“癌症之王”,其预后极差,症状隐匿,诊治困难,近年来,癌症干细胞（Cancer stem cells,CSC）在癌症的发生和发展中发挥着吸引人的潜力,研究CSC的特征并利用CSC特异性治疗方式来改善胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）的预后,已经成为一项重要的医学研究课题,为临床治疗提出了新的思路和办法。Micro RNAs（miRNAs）是一类小的非编码RNA分子
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背景:胰腺癌被称为“癌症之王”,其预后极差,症状隐匿,诊治困难,近年来,癌症干细胞（Cancer stem cells,CSC）在癌症的发生和发展中发挥着吸引人的潜力,研究CSC的特征并利用CSC特异性治疗方式来改善胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）的预后,已经成为一项重要的医学研究课题,为临床治疗提出了新的思路和办法。Micro RNAs（miRNAs）是一类小的非编码RNA分子,它在遗传表达调控中起着关键作用,研究表明,过表达的miR-630可以抑制乳腺癌、胃癌、食管癌细胞的生长,但是,目前尚未发现它在胰腺癌中的诊断和预后价值。因此基于当前的研究,我们拟探讨miR-630在胰腺癌干细胞（Pancreatic Cancer Stem Cell,PCSCs）中的表达及功能影响。目的:检测胰腺癌干细胞中miR-630的表达情况,并探究miR-630对PCSCs干细胞样特性的影响。方法:1.体外培养胰腺癌细胞系PANC-1和正常胰腺细胞HPDE。2.流式细胞术分选并筛出PCSCs。3.qRT-PCR检测PCSCs中miR-630的表达情况。4.利用细胞转染,根据转染情况分为以下几组:mimic-NC组,miR-630mimic组,inhibitor-NC组,miR-630 inhibitor组,并通过EDU染色测定,克隆形成、细胞成球实验进一步分析miR-630对PCSCs自我更新和维持的影响。5.构建小鼠皮下异种移植瘤模型,评估不同处理的PCSCs的致瘤能力。分为agomir-NC组,miR-630-agomir组,antagomir-NC组,miR-630-antagomir组,测量皮下肿瘤的体积及重量,并用q RT-PCR检测瘤体内基因表达情况。结果:1.与正常胰腺细胞HPDE相比,PANC-1细胞中miR-630的表达显著降低（p＜0.05）,而PCSCs细胞中miR-630的表达下降更为明显（p＜0.05）。2.相比于mimic-NC组,miR-630 mimic组Ed U阳性表达率显著降低（p＜0.05）,这表明细胞增殖受到了抑制,低表达的miR-630导致相反的趋势。克隆形成、细胞成球实验显示,miR-630 mimic组的克隆数和球体形成能力显著降低,miR-630-inhibitor组导致相反的趋势（p＜0.05）。此外,发现在miR-630 mimic组中Nanog和Oct4的表达显著降低,而在miR-630-inhibitor组中的表达增加（p＜0.05）。3.注射miR-630 agomir后皮下肿瘤的体积和重量显著降低,而miR-630antagomir则增加（p＜0.05）。对肿瘤中miR-630表达的检测也表明miR-630agomir使miR-630的表达升高,而miR-630 antagomir使miR-630的表达降低。结论:1.miR-630在PCSCs中表达降低。2.miR-630的过表达抑制PCSCs的增殖和干细胞维持能力。3.miR-630的过表达抑制体内肿瘤的生长。4.miR-630可以有效抑制胰腺癌的发生和发展,有望作为胰腺癌基因治疗的新靶点。
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