论文部分内容阅读
目的
①观察电针阳明经穴治疗高血压大鼠的降压效应；②通过对高血压大鼠腹主动脉的蛋白免疫印迹、PCR分析和血清ELISA检测，探究电针阳明经穴的内皮保护作用是否与Ghrelin介导的p38MAPK/eNOS信号转导通路有关；③通过16sRNA测序技术观察电针阳明经穴对高血压大鼠肠道菌群的影响，以及菌群与Ghrelin的相关性。
方法
选择SPF级自发性高血压大鼠(SHR)24只和正常血压大鼠(WKY)8只，其中WKY大鼠为正常血压对照组(WKY)，24只SHR大鼠按随机数字表法，随机分为自发性高血压组(CG)、电针阳明组(EG)、Ghrelin基因阻断+电针阳明组(GI)，每组8只。干预方法为：WKY和CG两组大鼠每日捆绑束缚20分钟，每周5次，共持续4周；EG和GI两组大鼠接受每周5次的电针治疗，穴位选择手阳明大肠经曲池穴，足阳明胃经人迎穴、足三里穴及丰隆穴，连续干预4周；其中GI组大鼠于干预前1小时腹腔注射Ghrelin阻断剂，每周3次，连续4周。各组大鼠采用无创血压监测系统BP-2000测量血压。大鼠粪便采集时间为干预前一天及实验周期最后一日，检测指标为肠道内容物的菌群丰度和多样性等。实验周期完成后，通过麻醉取血处死大鼠，剪取腹主动脉进行相关检测：Westernblot检测腹主动脉的p-p38MAPK和eNOS的蛋白表达；RT-qPCR检测p38MAPK和eNOS的基因表达；ELISA检测血清中Ghrelin、NO、ET-1和TX-A2浓度。
结果
1、大鼠血压结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压大鼠血压明显升高，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
②与自发性高血压组大鼠相比，电针阳明组血压明显下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组血压有所升高，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
2、肠道菌群测序结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠菌群物种丰度和多样性变更低，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
②与自发性高血压组大鼠相比，电针阳明组大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性变高，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组大鼠相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性变低，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
④对血压的相关性分析后发现与其相关的菌群有：门水平上，收缩压与Bacteroidetes呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Firmicutes、Actinobacteria、Proteobacteria和Patescibacteria呈显著性的负相关(p＜0.05)；属水平上，收缩压与uncultured_bacterium呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Lachnospiraceae_NK4A136呈显著性的负相关(p＜0.05)。门水平上，舒张压与Bacteroidetes呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Actinobacteria、Proteobacteria和Patescibacteria呈显著性的负相关(p＜0.05)；属水平上，舒张压与uncultured_bacterium呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Romboutsia呈显著性的负相关(p＜0.05)；
⑤对血清中Ghrelin浓度的相关性分析后发现与其相关的菌群有：门水平的放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、Patescibacteria、Epsilonbacteraeota(p＜0.05)和属水平的Romboutsia(p＜0.05)。
3、蛋白免疫印迹结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达增强，eNOS蛋白表达降低，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达减少，eNOS蛋白表达增加，差异显著(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达升高，eNOS蛋白表达降低，差异显著(p＜0.05)。
4、实时荧光定量PCR结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达增加，eNOSmRNA表达降低，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达降低，eNOSmRNA表达增加，差异显著(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达增加，eNOSmRNA表达降低，差异显著(p＜0.05)。
5、酶联免疫吸附测定结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠血清中Ghrelin和NO浓度降低，ET-1和TX-A2浓度升高，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠血清中Ghrelin和NO浓度升高，ET-1和TX-A2浓度降低，差异有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠血清中Ghrelin和NO浓度降低，ET-1和TX-A2浓度升高，差异显著(p＜0.05)。
结论
1.电针阳明经穴可以有效降低SHR大鼠血压；
2.电针阳明经穴有保护血管内皮的作用；
3.电针阳明经穴可能是通过Ghrelin介导的p38MAPK/eNOS信号转导通路，达到保护血管内皮作用，发挥降压效应。
4.电针阳明经穴使高血压大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性更趋近于正常血压的大鼠，影响大鼠肠道菌群结构；Ghrelin基因阻断会减弱电针阳明经穴对肠道菌群物种丰度和多样性的作用；
5.电针阳明经穴后的血压值和血清中Ghrelin浓度变化均与肠道菌群特定菌属密切相关，提示电针阳明经穴可能是通过肠道菌群调控Ghrelin介导p38MAPK/eNOS信号转导通路，保护血管内皮，发挥降压作用。
①观察电针阳明经穴治疗高血压大鼠的降压效应；②通过对高血压大鼠腹主动脉的蛋白免疫印迹、PCR分析和血清ELISA检测，探究电针阳明经穴的内皮保护作用是否与Ghrelin介导的p38MAPK/eNOS信号转导通路有关；③通过16sRNA测序技术观察电针阳明经穴对高血压大鼠肠道菌群的影响，以及菌群与Ghrelin的相关性。
方法
选择SPF级自发性高血压大鼠(SHR)24只和正常血压大鼠(WKY)8只，其中WKY大鼠为正常血压对照组(WKY)，24只SHR大鼠按随机数字表法，随机分为自发性高血压组(CG)、电针阳明组(EG)、Ghrelin基因阻断+电针阳明组(GI)，每组8只。干预方法为：WKY和CG两组大鼠每日捆绑束缚20分钟，每周5次，共持续4周；EG和GI两组大鼠接受每周5次的电针治疗，穴位选择手阳明大肠经曲池穴，足阳明胃经人迎穴、足三里穴及丰隆穴，连续干预4周；其中GI组大鼠于干预前1小时腹腔注射Ghrelin阻断剂，每周3次，连续4周。各组大鼠采用无创血压监测系统BP-2000测量血压。大鼠粪便采集时间为干预前一天及实验周期最后一日，检测指标为肠道内容物的菌群丰度和多样性等。实验周期完成后，通过麻醉取血处死大鼠，剪取腹主动脉进行相关检测：Westernblot检测腹主动脉的p-p38MAPK和eNOS的蛋白表达；RT-qPCR检测p38MAPK和eNOS的基因表达；ELISA检测血清中Ghrelin、NO、ET-1和TX-A2浓度。
结果
1、大鼠血压结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压大鼠血压明显升高，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
②与自发性高血压组大鼠相比，电针阳明组血压明显下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组血压有所升高，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
2、肠道菌群测序结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠菌群物种丰度和多样性变更低，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
②与自发性高血压组大鼠相比，电针阳明组大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性变高，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组大鼠相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性变低，差异具有统计学意义(p＜0.05)；
④对血压的相关性分析后发现与其相关的菌群有：门水平上，收缩压与Bacteroidetes呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Firmicutes、Actinobacteria、Proteobacteria和Patescibacteria呈显著性的负相关(p＜0.05)；属水平上，收缩压与uncultured_bacterium呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Lachnospiraceae_NK4A136呈显著性的负相关(p＜0.05)。门水平上，舒张压与Bacteroidetes呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Actinobacteria、Proteobacteria和Patescibacteria呈显著性的负相关(p＜0.05)；属水平上，舒张压与uncultured_bacterium呈显著性的正相关(p＜0.05)，与Romboutsia呈显著性的负相关(p＜0.05)；
⑤对血清中Ghrelin浓度的相关性分析后发现与其相关的菌群有：门水平的放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、Patescibacteria、Epsilonbacteraeota(p＜0.05)和属水平的Romboutsia(p＜0.05)。
3、蛋白免疫印迹结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达增强，eNOS蛋白表达降低，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达减少，eNOS蛋白表达增加，差异显著(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠腹主动脉中p-p38MAPK蛋白表达升高，eNOS蛋白表达降低，差异显著(p＜0.05)。
4、实时荧光定量PCR结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达增加，eNOSmRNA表达降低，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达降低，eNOSmRNA表达增加，差异显著(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠腹主动脉中p38MAPKmRNA表达增加，eNOSmRNA表达降低，差异显著(p＜0.05)。
5、酶联免疫吸附测定结果：
①与正常血压组大鼠相比，自发性高血压组大鼠血清中Ghrelin和NO浓度降低，ET-1和TX-A2浓度升高，差异显著(p＜0.05)；
②与自发性高血压组对比，电针阳明组大鼠血清中Ghrelin和NO浓度升高，ET-1和TX-A2浓度降低，差异有统计学意义(p＜0.05)；
③与电针阳明组相比，Ghrelin基因阻断+电针阳明组的大鼠血清中Ghrelin和NO浓度降低，ET-1和TX-A2浓度升高，差异显著(p＜0.05)。
结论
1.电针阳明经穴可以有效降低SHR大鼠血压；
2.电针阳明经穴有保护血管内皮的作用；
3.电针阳明经穴可能是通过Ghrelin介导的p38MAPK/eNOS信号转导通路，达到保护血管内皮作用，发挥降压效应。
4.电针阳明经穴使高血压大鼠的肠道菌群物种丰度和多样性更趋近于正常血压的大鼠，影响大鼠肠道菌群结构；Ghrelin基因阻断会减弱电针阳明经穴对肠道菌群物种丰度和多样性的作用；
5.电针阳明经穴后的血压值和血清中Ghrelin浓度变化均与肠道菌群特定菌属密切相关，提示电针阳明经穴可能是通过肠道菌群调控Ghrelin介导p38MAPK/eNOS信号转导通路，保护血管内皮，发挥降压作用。