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目的:在以大鼠肝切除再生为模型研究细胞G0/G1期转换的前期工作中,发现一个新蛋白LRRC48,该蛋白在大鼠肝切除后短期内表达迅速上调,持续两小时后开始下降,而在与其相对应的假手术组中,该蛋白的表达始终处于低水平。目前对LRRC48蛋白的功能尚无研究。本课题研究了LRRC48蛋白对大鼠肝癌细胞CBRH-7919侵袭、转移能力等恶性表型的影响,以期增进对LRRC48蛋白功能的深入理解,从而可能对肿瘤防治产生积极影响。
方法:
1.通过细胞划痕实验检测LRRC48蛋白高表达/低表达对CBRH-7919细胞迁移能力的影响;
2.通过Transwell侵袭实验检测LRRC48蛋白高表达/低表达对CBRH-7919细胞侵袭能力的影响;
3.通过激光共聚焦鬼笔环肽标记法观察细胞微丝的分布,检测LRRC48蛋白高表达/低表达对CBRH-7919细胞骨架的影响;
4.建立裸鼠皮下移植瘤模型,检测LRRC48蛋白高表达/低表达对裸鼠体重及瘤体生长的影响;
5.用LRRC48蛋白高表达及对照、LRRC48蛋白低表达及对照的CBRH-7919细胞分别建立裸鼠肝癌原位模型;
6.裸鼠肺组织行HE染色,检测LRRC48蛋白高表达/低表达对肝癌的远处转移的影响。
结果:
1.细胞划痕实验结果显示LRRC48蛋白高表达组细胞与其对照组相比,迁移的细胞数目增多;而LRRC48蛋白低表达组细胞与其对照相组比,迁移的细胞数目减少;LRRC48蛋白高表达对照组、低表达对照组细胞与CBRH-7919细胞组相比,迁移的细胞数目较一致。
2.Transwell侵袭实验结果显示LRRC48蛋白高表达组细胞与其对照组相比,侵袭的细胞数目增加;而LRRC48蛋白低表达组细胞与其对照组相比,侵袭的细胞数目减少;LRRC48蛋白高表达对照组、低表达对照组细胞与CBRH-7919组细胞相比,侵袭的细胞数较一致。
3.鬼笔环肽标记法观察细胞微丝的分布显示,处理组细胞的形态较未处理组细胞有所改变,处理组细胞没有很好地铺展开,细胞边缘有回缩等贴壁不牢的现象。各组细胞形成的片状伪足无明显差别;
4.皮下注射各组细胞5天后观察肝癌裸鼠模型,瘤体形成,造模成功率为100%,注射LRRC48蛋白高表达组细胞的裸鼠成瘤体积大于LRRC48蛋白低表达组;后期,有的裸鼠皮下移植瘤出现萎缩、溃烂的现象,LRRC48蛋白高表达组发生率为25%(2/8),而LRRC48蛋白低表达组发生率是87.5%(7/8),P<0.01。
5.裸鼠肝原位癌模型中,肺脏出现明显转移灶,LRRC48蛋白高表达组形成的转移灶较LRRC48蛋白低表达组形成的转移灶多。
结论:
1.细胞划痕实验测定结果表明LRRC48蛋白高表达使CBRH-7919细胞迁移能力增强;LRRC48蛋白低表达使CBRH-7919细胞迁移能力减弱;
2.Transwell侵袭实验测定结果表明LRRC48蛋白高表达使CBRH-7919细胞侵袭能力增强;LRRC48蛋白低表达使CBRH-7919细胞侵袭能力减弱。
3.裸鼠移植瘤模型中,LRRC48蛋白可能促进CBRH-7919细胞在裸鼠皮下的增殖,同时可能促进血管新生,抑制细胞凋亡,延缓肿瘤坏死。
4.裸鼠肝原位癌模型中,LRRC48蛋白高表达可促进CBRH-7919在裸鼠体内的转移。