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目的:脑膜瘤起源于蛛网膜颗粒细胞,占中枢神经系统肿瘤的13–25%,临床研究表明脑膜瘤发生与颅脑外伤病史有关,提示脑膜瘤发生可能与颅脑外伤后所致慢性炎症应答有关,Cox-2是一种炎症诱导酶,是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶[16],而前列腺素具有促血管生成、细胞增殖和抗凋亡特性。原癌基因Ets-1及基质金属蛋白酶MMP-1参与不同肿瘤的细胞的生长、浸润、血管生成和转移。尼美舒利是一个选择性的环氧化酶-2 (COX-2)抑制剂,具有抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡的作用。本实验拟通过脑膜瘤短期原代培养建立其体外模型,进而研究尼美舒利对体外原代培养脑膜瘤细胞Ets-1及MMP-1的表达和对脑膜瘤细胞增殖及凋亡的影响,并探讨应用尼美舒利治疗脑膜瘤的可能性。方法:取新鲜脑膜瘤标本进行脑膜瘤细胞体外原代培养,当脑膜瘤细胞传至二、三代后,免疫组化染色法检测上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达情况对脑膜瘤细胞进行鉴定,采用不同浓度的尼美舒利(75-600μmol/ L)进行干预,用倒置显微镜观察细胞并详细记录细胞生长状况和形态学改变。观察加药前后及不同药物浓度组细胞形态的不同。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定尼美舒利对脑膜瘤细胞增殖抑制率(PI);吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色、凋亡细胞DNA Ladder电泳分析及末端标记法(TUNEL)检测尼美舒利作用下体外培养人脑膜瘤细胞凋亡变化,采用免疫组化和Western blotting法分析干预前后脑膜瘤细胞中Ets-1及MMP-1蛋白的表达情况。结果:(1)成功进行了13例脑膜瘤短期原代培养,包括建立短期培养条件、传代方法、冻存和复苏方法和肿瘤细胞的鉴定。(2)在培养过程中,观察到加药组部分细胞轮廓模糊,折光性变弱,细胞变得粗糙,胞内出现空泡、颗粒状堆积物,并可见细胞从培养板壁脱落,细胞较对照组稀疏,细胞之间空隙增大,且药物浓度越大,此变化越明显,而对照组细胞透明度大、折光性强、轮廓较清。(3)免疫组织化学和Western blotting显示脑膜瘤细胞Ets-1及MMP-1高表达。尼美舒利作用于脑膜瘤细胞24h、48h后,Ets-1及MMP-1蛋白的表达均下降。(4)MTT实验结果显示,各浓度组尼美舒利对脑膜瘤细胞均有抑制作用,随着作用时间的延长和浓度的增加,对脑膜瘤细胞的增殖抑制作用越明显,呈良好的剂量和时间依赖性。(5)AO/EB染色在尼美舒利作用脑膜瘤细胞后可观察到凋亡小体等凋亡细胞核形态特征,DNALadder电泳法在600μmol/ L组可看到明显的“梯状”现象,TUNEL显示与对照组相比实验组细胞凋亡数明显增加。结论:尼美舒利可明显抑制人脑膜瘤细胞增殖,且呈时间、剂量依赖性。尼美舒利抑制脑膜瘤的作用机制除了其对COX-2抑制作用外,还可能与下调ETS-1、MMP-1的表达有关。