【摘 要】
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目的:(1)研究钙载体(CI)联合PMA诱导K562细胞向树突状细胞(DC)分化的作用(2)研究CI和PMA诱导的K562细胞刺激骨髓细胞杀伤K562细胞的作用。方法:取对数期生长的K562细胞,以RPMI16
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目的:(1)研究钙载体(CI)联合PMA诱导K562细胞向树突状细胞(DC)分化的作用(2)研究CI和PMA诱导的K562细胞刺激骨髓细胞杀伤K562细胞的作用。方法:取对数期生长的K562细胞,以RPMI1640培养基悬浮培养,实验组1加入CI(375ng/ml)和PMA(10ng/ml),实验组2只加PMA(10ng/ml),实验组3只加CI(375ng/m),对照组不加CI和PMA。培养96h后,倒置显微镜观察形态变化,透射电镜观察超微结构,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原;混合淋巴细胞实验检测CI联合PMA诱导的K562细胞刺激淋巴细胞增殖反应的功能;用CI联合PMA诱导的K562细胞刺激正常人骨髓细胞形成效应细胞,不用K562细胞刺激的正常人骨髓细胞为对照效应细胞,以未经诱导的K562细胞作为靶细胞,将效应细胞和靶细胞按比例1:1,2:1,10:1混合,培养96h后收获细胞,RT-PCR检测混合细胞的BCR/ABL基因表达,另外,用PKH荧光染料预先标记靶细胞,效应细胞和靶细胞混合培养后,流式细胞技术检测混合细胞中的靶细胞百分数,计算杀伤率。结果:K562细胞经CI和PMA诱导96h后在倒置显微镜和电镜下观察到具有典型的DC的形态特征;流式细胞仪检测到CD83、CD86、CD80、CD40、HLA-DR和CD1a表达显著提高,与同种淋巴细胞混合培养使后者增殖倍数明显提高。骨髓细胞经CI+PMA诱导的K562细胞刺激(效应细胞),与K562细胞(靶细胞)混合培养后,混合细胞的BCR/ABL基因表达下降,流式细胞仪检测发现混合细胞中靶细胞数量也明显减少,计算杀伤率在效靶比为1:1,2:1,10:1分别为29.6%,55.2%和65.8%。结论:PMA联合CI能快速诱导K562细胞向DC分化,所得细胞在形态上具有典型的树突状结构,表达T细胞活化必须的表面分子,有高效刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。将这些细胞加入骨髓混合培养能刺激骨髓中的T细胞产生特异性的抗白血病细胞毒性淋巴细胞(CTL)效应。
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