前言:　　 急性髓系白血病(AML)是造血干、祖细胞来源的恶性克隆性血液系统疾病,是成人急性白血病的主要类型,其发病机理尚不十分清楚,特别是复发难治的患者仍是临床的主要问题,明确AML的发病机制有可能为AML的治疗提供新的靶点。FA-BRCA通路为我们的研究提供了新的可能途径。　　 范可尼贫血(FA)是一种罕见的染色体隐性遗传病,除FA-B为X-连锁隐性遗传外,其余均为常染色体隐性遗传。其临床特征主要表现为进行性的骨髓造血功能衰竭,伴发多种先天畸形及明显的肿瘤易感性,尤其是AML。目前已经发现了15种FA亚型(A,B,C,D1,D2,E,F,G,I,J,L,M,N,O和P),其中八种蛋白(FANC-A,B,C,E,F,G,L,M)和FAAP24、FAAP100(FA相关蛋白24、100)形成FA核心复合物体(FAcorecomplex),启动FANCD2及FANC1蛋白的单泛素化,单泛素化的FANCD2及FANC1蛋白与BRCA1、FANCD1、FANCN、FANCJ、FANCC、FANCE、FANCG、RAD51C、SLX4、RPA、ATR及NBS1等共同参与DNA损伤修复和对丝裂霉素C(MMC)、顺铂(CDDP)等的抵抗。其中FA核心复合体的形成是该过程的关键环节,并且此复合体的稳定是决定下游一系列反应正常进行的基础。研究发现FANCG可与FANCA发生相互作用,这种相互作用是维持组成FA核心复合体八种蛋白的稳定和进入细胞核所必须的,也是FA核心复合体在核内聚集的早期事件。在众多的FA患者中,FANCG蛋白缺失患者较其他亚型更易进展为AML/MDS(骨髓增生异常综合征),进一步研究发现这些FA患者中存在FANCG基因突变。已有文献报道FANcG蛋白表达缺失与散发性口腔癌和家族性胰腺癌的发生存在一定关联。另有研究显示FANCG蛋白在AML细胞株中存在表达缺失。文献证明FANCG蛋白的调节和活化在FA-BRCA通路中起重要作用。　　 AML是当今世界尚未攻克的医学难题,对患者的生活质量和生命健康都是严重的威胁,而现有的治疗手段均不能有效的保证治愈本病,同时在治疗过程中会对患者造成一定的痛苦和损伤。本研究拟应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测AML患者与对照组中FANCGmRNA的表达状态,通过多样本统计是否存在明显差异,揭示FANCGmRNA表达状态和AML发病及预后的关系,从而为研究AML的发病机制提供新的思路,为治疗提供新的靶点。　　 材料与方法:　　 一、研究对象　　 2011年1月至2011年9月在中国医科大学附属第一医院血液内科门诊及病房就诊的AML初诊患者54例(男26例,女28例,中位年龄48岁)、完全缓解(CR)46例(男25例,女21例,中位年龄44岁)、对照组36例(骨髓细胞形态学检查提示为:继发性贫血、缺铁性贫血及未见特征性血液病改变,男23例,女13例,中位年龄48.5岁)。病例诊断参照第三版《血液病诊断及疗效标准》。　　 二、主要试剂与器材　　 淋巴细胞分离液(普利莱基因技术有限公司)、Trizol(宝生物工程(大连)有限公司)、PCR引物合成(宝生物工程(大连)有限公司)、PrimeScript(R)RTreagentKitPerfectRealTime(宝生物工程(大连)有限公司)、SYBR(R)PremixExTaqTM(宝生物工程(大连)有限公司)、PCR仪(2720ThermalCycler,ABI)、Rotor-Gene6000荧光实时定量PCR仪(CorbettResearch公司)。　　 三、实验方法　　 (一)密度梯度法提取骨髓液单个核细胞。　　 (二)应用Trizol按常规方法提取RNA。　　 (三)cDNA合成,引物设计与合成。　　 (四)SYBRGreenⅠ实时定量PCR及产物分析。　　 (五)数据处理和统计学分析。　　 利用相对定量公式2-△△Ct计算FANCG基因表达水平的差异。结果分析用SPSS17.0软件进行,统计描述采用中位数及-X±SD表示,组间差异若方差齐则采用独立样本t检验,同时对FANCG基因表达情况与年龄及原始细胞数进行相关性分析,采用Pearson相关检验。　　 实验结果:　　 AML初诊组FANCGmRNA的相对表达量为0.56±0.27,AMLCR组为0.75±0.54,对照组为0.85±0.45,AML初诊组较对照组FANCGmRNA的表达量明显降低(P＜0.05),AML初诊组较AMLCR组的表达量亦明显降低(P＜0.05),AMLCR组与对照组比较表达量无统计学差异(P＞0.05)。AML初诊组、AMLCR组及对照组FANCG基因表达与年龄均无直线相关关系(P=0.336、P=0.766、P=0.360),AML初诊组与原始细胞数亦无直线相关关系(P=0.619)。　　 结论:　　 通过本实验检测到初诊AML组FANCGmRNA的表达明显减低,CRAML组的表达与对照组无明显差别,推测部分AML患者中FANCGmRNA的表达减低使FANCG蛋白的表达减少,从而致使FANCD2蛋白不能泛素化,FA通路被破坏,导致白血病细胞中DNA修复障碍,提示FANCG基因可能与AML的发病及预后有一定相关性。