目的：谷氨酸(glutamate，Glu)是中枢神经系统重要的兴奋性神经递质，在哺乳动物中枢神经系统中广泛分布并在包括学习、记忆、脑的发育以及突触可塑性等方面发挥重要作用，Glu过度激活其受体所引起的兴奋性神经毒性在神经损伤的发生中也有重要地位。研究发现谷氨酸NMDA受体在外周有广泛表达，推测其在外周组织中有重要的生理和病理意义。本研究在本实验室早期发现NMDA受体阻断剂MK-801可以减轻内毒素肺损伤的基础上，观察NMDA对中性粒细胞与内皮细胞粘附的影响，并对其可能机制进行研究，论证NMDA受体的激活可通过促进中性粒细胞与内皮细胞相互粘附而加重肺内炎症过程的假说，为临床急性肺损伤防治的研究提供新的靶点。 方法：采取新鲜人全血分离中性粒细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304的培养，采用不同浓度(10<-9>～10<-3>)NMDA分别处理中性粒细胞和内皮细胞，观察中性粒细胞与人脐静脉内皮细胞的粘附变化。分别采用免疫细胞化学、Westem Blot以及RT一PCR的方法观察NMDA受体一型亚基(NMDA receptor l，NMDARl)在中性粒细胞和内皮细胞的表达。以流式细胞术观察NMDA处理后中性粒细胞粘附分子CDllb／CDl8的表达变化。 结果：1．RT—PCR证实，在内皮细胞和中性粒细胞中均存在NMDA 受体NMDARl亚基的mRNA表达。采用Westem Blot证明内皮细胞和中性粒细胞均存在NMDARl受体亚基的蛋白表达，但中性粒细胞的蛋白表达强于内皮细胞。进一步采用免疫细胞化学的方法研究也证实，在中性粒细胞及内皮细胞表面有阳性染色。 2．用不同浓度的NMDA处理中性粒细胞4小时后，将中性粒细胞与脐静脉内皮细胞ECV304共培养2小时，与正常对照组比较，中性粒细胞与内皮细胞的粘附变化率在较低剂量(10<-9>～10<-6>mol／L)时随NMDA浓度而升高，而剂量高于10<-6>mol／L时则随NMDA浓度的升高而降低，在10<-6>mol／L浓度达到最高粘附变化率(p<0.01)。较高剂量时测定中性粒细胞培养上清LDH活性显示细胞损伤情况随NMDA浓度升高而升高，当NMDA浓度>l0<-5>mol／L时，中性粒细胞培养上清LDH活性与正常对照组比较有显著增高(p<0.01)。NMDA处理内皮细胞后对中性粒细胞与内皮细胞的粘附变化率无显著性影响 (P>0.05)3．采用流式细胞术测定显示，NMDA处理中性粒细胞4小时后细胞表面粘附分子CDllb平均荧光强度高于对照组(p<0.05)。 结论：1．中性粒细胞及ECV304内皮细胞有NMDA受体NMDAR1的表达，但中性粒细胞的NMDAR1蛋白表达强于ECV304内皮细胞。 2．中性粒细胞膜上的NMDA受体激活可以促进中性粒细胞粘附于ECV304内皮细胞表面。内皮细胞上的NMDA受体激活对中性粒细胞与ECV304内皮细胞间相互粘附无明显影响。 3．NMDA受体激活可以上调中性粒细胞表面粘附分子CDllb表达，介导中性粒细胞与ECV304内皮细胞间粘附。 4．高浓度NMDA具有毒性作用，可损伤中性粒细胞。 以上结果提示，中性粒细胞膜上NMDA受体的激活可以上调粘附分子CDllb表达而促进中性粒细胞与内皮细胞的相互粘附。