【摘 要】
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目的:肺癌的发病率和死亡率都位居全球最高,我国拥有世界三分之一的肺癌患者。目前肺癌的主要治疗方法为外科手术、放化疗和靶向治疗,但预后并不理想,五年存活率仍然很低。因此,深入了解肺癌发生发展的机制显得尤为重要。细胞叠套结构(Cell-in-cell structure,CICs)是近年发现的一种新的非凋亡的细胞死亡方式,肿瘤组织的细胞叠套结构中,内化细胞的命运主要有分裂、逃逸、死亡和长时间滞留,其中
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目的:肺癌的发病率和死亡率都位居全球最高,我国拥有世界三分之一的肺癌患者。目前肺癌的主要治疗方法为外科手术、放化疗和靶向治疗,但预后并不理想,五年存活率仍然很低。因此,深入了解肺癌发生发展的机制显得尤为重要。细胞叠套结构(Cell-in-cell structure,CICs)是近年发现的一种新的非凋亡的细胞死亡方式,肿瘤组织的细胞叠套结构中,内化细胞的命运主要有分裂、逃逸、死亡和长时间滞留,其中细胞死亡的比例最高,从而提示细胞叠套结构可能是一个肿瘤发生发展的影响因素。同时,IL-24具有广谱而特异的抗瘤活性,对正常细胞几乎没有毒性;它不仅能够刺激机体免疫系统对肿瘤发生反应,增强肿瘤细胞的放化疗敏感性,其表达水平还与一些组织类型癌症患者的预后正相关。本文通过对肺癌组织标本中CICs和IL-24表达水平的检测和分析,以明确它们与肺癌患者临床信息的相关性,以及IL-24表达水平与CICs的相关性。方法:首先,收集肺癌组织标本,石蜡包埋后切片。其次,对石蜡切片进行EML荧光染色(Epithelium-Macrophage-Leukocytes stain,EML),用多光谱成像扫描显微镜扫描拍照和图像拆分软件inForm处理图像,并对CICs进行计数。然后,优化免疫组化染色条件(抗体种类、抗体浓度和修复条件),用两种IL-24抗体对肺癌组织切片进行染色和人工打分,以分析IL-24的表达水平。最后,利用Prism和SPSS软件对CICs计数结果和IL-24免疫组化打分数据进行统计学处理,分析CICs和IL-24表达水平与患者临床信息的相关性,绘制Kaplan-Meier存活曲线;以及IL-24表达水平与CICs间的相关性。结果:(1)在145例肺癌肿瘤组织中,存在四种CICs结构,分别为肿瘤细胞吞肿瘤细胞(CD45-/CD68-)、巨噬细胞吞肿瘤细胞(CD45-/CD68+)、肿瘤细胞吞巨噬细胞(CD68+/CD45-)和肿瘤细胞吞免疫细胞(CD45+/CD68-)。第一种为同质CICs,为肺癌组织中的主要形式,数量占比为92.9%;后三种为异质CICs,数量占比为15.7%。(2)在63例肺鳞癌中,CICs阳性与肿瘤大小负相关(p<0.05),即肿瘤越小,CICs阳性越多;同时,CICs高阳性和CICs高密度还与病理分级负相关,即病理分级越早,CICs的阳性越高,密度越大(p<0.01)。而在48例肺腺癌中,CICs阳性与患者病变位置相关,位置越靠下,CICs阳性越多(p<0.05)。(3)在9例中叶肺癌,CICs阳性患者的预后显著好于阴性患者(p<0.01),且CICs阳性越高预后越好(p<0.05),在下叶肺腺癌患者中,也存在相似现象(p<0.05)。(4)在四种IL-24抗体中,筛选出AF1965和A03793两种抗体的染色效果最佳;在AF1965染色的128例有效切片中,11例阴性(8.6%),117为阳性(91.4%);在A03793的134例有效染色中,79例阴性(59.0%),55例阳性(41.0%)。(5)在AF1965染色结果中,IL-24高表达与肺癌病变位置有关(p<0.05),病变位置越靠下,IL-24表达水平越高,且这种相关性主要出现于肺腺癌中(p<0.05);而抗体A03793染色中,28例IL-24阳性的肺腺癌患者预后显著好于阴性患者(p<0.01)。(6)在CICs与IL-24染色都有效的128例中,不仅CICs阳性与IL-24阳性(p<0.05)和高表达(p<0.05)都正相关,尤其是在45例肺腺癌中(p<0.01);而且,在45例腺癌中,IL-24高表达与CICs高阳性(p<0.05)和hoCICs高阳性正相关(p<0.05)结论:细胞叠套结构与肺鳞癌肿瘤大小和病理分级负相关,IL-24高表达的肺腺癌患者预后显著高于低表达患者,而CICs的阳性表达与高表达都和IL-24高表达正相关,这些为深入了解肺癌的发展进程提供了实验数据。
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