FOXG1在结直肠癌侵袭与转移的作用机制研究

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目的:  构建FOXG1的慢病毒干扰(shRNA)质粒及表达质粒,通过敲低和过表达FOXG1探讨其在结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。  方法:  应用Western blotting检测FOXG1在RKO、SW480、SW620、LOVO、DLD-1五种结直肠癌细胞株中蛋白的表达水平,设计并合成FOXG1的shRNA片段(shFOXG1),运用DNA重组技术获得重组质粒,经双酶切技术及测序方法鉴定后进行慢病毒的包装、纯化及稳定转染,筛选后获得稳定的结直肠癌细胞株,应用Western blotting和qRT-PCR技术检测FOXG1敲低和过表达效率及EMT关键因子E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist mRNA和蛋白的变化,显微镜观察敲低后细胞形态学变化,采用划痕实验测迁移能力变化,Transwell检测侵袭迁移能力的变化。  结果:  五种结直肠癌细胞株中,FOXG1在RKO细胞中蛋白表达量最高,而在DLD-1细胞中表达量最低,与对照组相比较,在RKO细胞中敲低FOXG1,细胞形态由长梭型变成了类圆形或者多边形,细胞极性和紧密连接增加,细胞迁移距离明显降低,侵袭转移穿过小室的细胞数也明显减少,EMT关键因子E-cadherin表达增高,Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist表达降低,而过表达FOXG1组则呈现相反的趋势。  结论:  FOXG1在结直肠癌中高表达,其通过调控EMT,参与结直肠癌的侵袭与转移。
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