目的:制备左旋聚乳酸-β-磷酸三钙(Poly(L-lactic acid)/β--tricalcium phosphate,PLLA/β-TCP)复合多孔骨支架,对其性能、体外细胞水平及体内组织相容性进行研究。方法:1.采用溶剂自扩散-模压成型--盐沥滤、冷冻干燥法制备了β-TCP含量分别为0、10%、20%、30%、40%、50%的PLLA/β-TCP复合多孔支架(以下简称纯PLLA、P/T10、P/T20、P/T30、P/T40、P/T50)。用扫面电镜观测不同β-TCP含量的复合多孔支架的微观形貌,用量重法测量其孔隙率,用动静态疲劳试验机检测各组复合多孔支架的力学强度。2.各组复合多孔骨支架接种相同量的骨髓间充质干细胞培养3天后固定,用扫描电镜观察多孔支架爬行细胞的数量和形态以评价骨支架的细胞相容性。此外,用新鲜培养基作对照,用各组骨支架浸提液培养骨髓间充质干细胞,分别于细胞培养第1天、第3天、第5天及第7天用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测各组细胞的吸光度以评价骨支架的生物相容性。用含β-TCP的复合骨支架浸提液及纯PLLA骨支架浸提液分别培养C3H10细胞(小鼠骨髓间充质干细胞)至第7d及第21d,第7d用萘酚AS-MX碱性磷酸盐溶液和快速蓝重氮盐混合染液进行碱性磷酸酶染色,第21d用茜素红s进行钙盐沉积染色评价plla/β-tcp复合多孔骨支架的骨诱导性。3.选取健康成年新西兰大白兔30只,随机分为空白对照组,plla组,p/t10组、p/t30组及p/t50组,每组6只。每只大白兔均制备双侧股四头肌肌袋、肱二头肌肌袋及臀肌肌袋,将plla组,p/t10组、p/t30组及p/t50组复合多孔支架植入新西兰大白兔的肌袋内,分别于植入后2月、4月及6月处死每组中的2只兔子,取出骨支架及其周围0.5cm的组织、肝脏及肾脏,肝肾组织切片行he染色,骨支架切片行he染色及vg染色,对plla/β-tcp复合多孔支架的组织相容性及生物安全性进行研究。结果:1.(1)plla/β-tcp复合多孔支架成白色中空状、质均匀,骨支架表面及横截面微孔丰富,孔径多分布于5-400um之间,并具有一定的孔隙交通率。(2)量重法检测骨支架孔隙率最大为(65.54±2.03)%,各组复合骨支架孔隙率随着β-tcp含量的增加基本呈逐渐降低的趋势(p<0.05)。(3)根据新西兰大白兔的桡骨尺寸设计,经模具加压的p/t40复合骨支架的弹性模量及抗弯强度最大,其值分别为(626.07±25.96)mpa及(58.12±1.96)mpa,弹性模量达到人体松质骨水平。2.(1)纯plla骨支架为疏水性材料,不利于细胞的粘附生长。plla/β-tcp复合多孔支架表面粗糙,β-tcp的引入可以改善支架材料的亲水性及骨传导性,有利于细胞的爬行生长,各组复合骨支架的细胞接种面在扫描电镜下均可观察到不同程度的细胞爬行生长。(2)经各组骨支架浸提液培养的细胞于各个时间点的光吸收值与新鲜培养基培养的细胞的光吸收值相当(p>0.05),说明含不同β-磷酸三钙比例的复合支架浸提液与培养基近似,骨支架浸提液无毒性成分,对mscs细胞无毒性抑制作用。(3)plla/β-tcp复合多孔支架浸提取液培养细胞后碱性磷酸酶染色阳性及钙盐沉积染色阳性,表明骨支架具有一定的骨诱导性可能。3.骨支架植入后2月,未见骨支架降解,支架材料周围覆盖疏松的纤维组织,水肿较明显,囊壁形成Ⅲ级。包囊组织内可见有大量的中性粒细胞和纤维母细胞,炎症细胞反应程度Ⅲ级。而p/t30及p/t50组骨支架周围纤维包囊水肿程度较轻,囊壁形成Ⅱ级,炎症细胞反应程度Ⅱ级。骨支架植入后4月,仍未见骨支架降解,支架材料表面纤维包囊较厚,囊壁形成Ⅱ级,纤维包囊有部分中性粒细胞及淋巴细胞,炎症细胞反应程度Ⅱ级,组织水肿消退。而p/t30及p/t50组骨支架囊壁形成Ⅰ级,炎症细胞反应程度Ⅰ级。植入后6月,p/t30及p/t50组骨支架表面可见部分降解,支架局部纤维包囊变薄,由1-2层胶原纤维和少量纤维细胞组成,囊壁形成0级,包囊内仅见少许的淋巴细胞浸润,炎症细胞反应程度Ⅰ级。而p/t10组及plla组支架囊壁形成Ⅰ级,包囊内仍可见淋巴细胞浸润,炎症反应程度Ⅰ级。支架降解的新西兰大白兔的肝肾组织切片行he染色未发现组织反应及坏死情况。he染色及vg染色可见部分组织在骨支架中爬行生长。依照国家标准中动物体内埋植实验评价方法,骨支架材料在动物体内无反应或仅有轻度组织反应,说明plla/β-tcp复合骨支架具有良好的组织相容性。结论:通过溶剂自扩散-模压成型--盐沥滤、冷冻干燥法制备的PLLA/β-TCP复合支架孔隙较丰富、具备良好的力学性能,细胞相容性及生物相容性良好,且具有一定的成骨诱导活性可能,是一种可供选择的组织工程骨支架。