目的:构建以乙脑病毒疫苗株为骨架,表达寨卡病毒prM/E蛋白的嵌合病毒JE/ZIKV(PRVABC59),并测定该嵌合病毒的生长特性,免疫原性,初步鉴定其安全性和保护性,以评价该嵌合病毒是否可发展为寨卡病毒候选疫苗株。方法:利用标准感染性克隆技术,将寨卡病毒prM/E基因替换至乙脑病毒疫苗株相应区域,构建以乙脑病毒疫苗株为骨架的寨卡嵌合病毒感染性克隆,体外转录得RNA,再通过电转染BHK-21细胞拯救病毒。病毒拯救成功后,通过噬斑实验、免疫荧光、基因测序鉴定病毒。再通过生长曲线检测其生长特性;通过脑内注射三周龄昆明小鼠和3日龄昆明乳鼠评判其神经毒力;用该嵌合病毒免疫昆明小鼠,分别于免疫后1、3、5天采血,分离血浆,做噬斑实验检测病毒血症;并用该嵌合病毒免疫昆明小鼠3-10周后,采血,分离血清,利用50%蚀斑减少中和实验检测病毒产生中和抗体的能力;用JE/ZIKV(PRVABC59)嵌合病毒腹腔接种昆明小鼠,免疫3周后用JE/ZIKV(MR766)攻击小鼠,检测其免疫保护能力。结果:酶切和测序结果表明嵌合病毒感染性克隆构建成功;电转染BHK21细胞5天后,细胞出现明显病变,收集上清液,经病毒噬斑实验检测到病毒,再经病毒测序证实嵌合病毒拯救成功,未发生突变。免疫荧光证实该嵌合病毒能表达寨卡病毒prM/E蛋白以及乙脑病毒NS1蛋白。噬斑实验显示该嵌合病毒噬斑呈针尖样小噬斑,明显比乙脑病毒疫苗株噬斑小。生长曲线显示其增殖速度慢于乙脑疫苗株,M.O.I.=0.01时在72h后滴度达高峰(6.071gPFU)。细胞增殖活性实验发现,以M.O.I.=0.1感染BHK21细胞60h后,经CCK-8检测,嵌合病毒JE/ZIKV(PRVABC59)感染组细胞的增殖活性明显高于乙脑病毒疫苗株感染组。动物实验结果显示嵌合病毒脑内攻击无论是小鼠还是乳鼠都没有造成死亡及明显临床症状,表现出极低的神经毒力。病毒血症结果显示:该嵌合病毒在小鼠体内没有检测到明显的病毒血症。50%PRNT显示:该嵌合病毒免疫小鼠3周-10周,血清中中和抗体的阳转率达100%,第3周中和抗体效价达到高峰GMT=85。免疫保护实验显示:用该嵌合病毒免疫昆明小鼠后,对JE/ZIKV(MR766)的脑内攻击可产生一定的免疫保护(保护率为30%)。结论:成功构建JE/ZIKV(PRVABC59)嵌合病毒感染性克隆,并拯救得到嵌合病毒JE/ZIKV(PRVABC59),该嵌合病毒对小鼠无明显脑内神经毒力,具有较好的安全性,同时该病毒可以产生有效的中和抗体,具有一定的免疫原性,有进一步发展为寨卡病毒候选疫苗株的潜质。