研究背景和目的Rab1A,Ras家族的小分子GTP酶,在进化过程中高度保守,以介导内质网与高尔基体间的囊泡转运被熟知。近年来发现,除了其经典的囊泡转运功能,Rab1A在营养感应、信号传导、细胞迁移和细胞表面受体的呈递等多种生物学功能中发挥重要调控作用。同时,有越来越多的文献报道Rab1A蛋白表达失调与多种疾病（如癌症,心肌病和原发性震颤性麻痹）密切相关。目前,Rab1A已经在不同类型的肿瘤中被发现显著高表达并促进肿瘤的发生发展和不良临床预后,提示Rab1A可能是有价值的个体化治疗靶点。目前,Rab1A在肺癌中的研究尚未见报道。因此,作为中国发病率和致死率最高的恶性肿瘤,在肺癌中检测Rab1A的表达情况和进行生物学功能与机制的研究具有重要意义。研究方法1.免疫组化染色检测60例不同病理类型的肺癌组织中Rab1A表达情况。收集并整理该60例肺癌患者的临床病理资料,将Rab1A蛋白表达水平与常用临床病理参数的相关性进行统计分析。2.免疫印迹实验检测一组不同病理类型肺癌细胞系的Rab1A蛋白表达情况,并分析Rab1A蛋白表达与关键肿瘤信号通路活性的相关性;用Rab1A的siRNA序列转染高表达的肺癌细胞系,免疫印迹实验检测敲低Rab1A对mTOR信号通路的影响;用MTT法和流式细胞仪分别检测敲低Rab1A对细胞增殖和细胞周期的影响。3.在Rab1A高表达的肺癌细胞系H1650用siRNA成功敲低Rab1A,应用信号通路广筛磷酸化抗体芯片筛选Rab1A可能调控的磷酸化蛋白。4.免疫印迹实验验证芯片结果;用RTCA和transwell检测敲低Rab1A对肺癌细胞迁移侵袭的影响。研究结果1.与癌旁组织相比,Rab1A在不同病理类型的肺癌组织中均显著高表达。Rab1A表达主要定位在细胞质,细胞核染色较淡;肿瘤实质细胞染色显著,间质组织和淋巴样细胞染色微弱。在不同的肺癌病理类型中,腺癌,腺鳞癌和大细胞肺癌组织中Rab1A的表达程度相似,阳性染色率均高达100%。腺癌的H评分（中位数211.5）高于其它病理学类型,小细胞肺癌H评分最低。用Kruskal-Wallis检验统计分析发现,Rab1A蛋白表达高低与T分期（P=0.039）和肿瘤大小（P=0.002）显著相关。Rab1A蛋白表达水平越高,T分期越高,肿瘤体积越大。然而,Rab1A蛋白的表达与年龄、性别和AJCC分期等其它参数之间没有明显的相关性。2.与永生化的肺/支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,Rab1A蛋白表达在不同病理类型细胞系中均显示不同程度的升高;Rab1A表达水平与mTORC1的底物P-S6K1^T389、mTORC2的底物P-AKT^S473以及MAPK信号通路底物P-ERK^T202/Y204,P-C-JUN^S63和P-MK2^T334的水平均无显著的相关性;在一组肺癌细胞系中成功敲低Rab1A,未观察到mTORC1(P-S6K1^T389)和mTORC2(P-AKT^S473)信号水平的变化;敲低Rab1A,不影响肿瘤细胞生长,对细胞周期影响不显著。3.以Fold Change大于1.2为cut off值,磷酸化抗体芯片筛选出35个Rab1A可能调控的磷酸化蛋白。候选蛋白主要集中在JAK/STAT信号通路、MAPK信号通路和Integrin信号通路。4.Rab1A敲低后,P-ERK8^{Thr175/Tyr177}、P-c-Jun^S473、P-STAT3^S727、P-Integrin beta-3^T773、P-STAT6^T641均无明显变化,但是P-JAK1^T1022水平同步降低。为了进一步证实Rab1A调控P-JAK1^T1022,构建Rab1A过表达质粒和转染Rab1A低表达的肺癌细胞系SK-LU-1和A549。经免疫印迹实验验证,过表达Rab1A,P-JAK1^T1022表达同步增高。研究结论1.Rab1A在肺癌组织中高表达,表达水平与T分期和肿瘤大小显著相关。Rab1A蛋白表达水平越高,T分期越高,肿瘤体积越大。2.Rab1A在肺癌细胞系中高表达,但与mTOR和MAPK信号传导通路的活性无明显相关性,敲低Rab1A对mTOR信号传导和肺癌细胞增殖及细胞周期无影响3.Rab1A在肺癌中可能通过JAK1蛋白的磷酸化促进肺癌细胞的迁移和侵袭。