研究背景DNA胞嘧啶甲基化是指基因组特定区域生成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-m C),是一种重要的表观遗传学修饰方式,在生物发育、基因组印迹和基因表达调控中发挥着重要的作用。5-mC可经TET(Ten-eleven translocation)蛋白家族羟化后生成5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC),启动DNA去甲基化过程。TET蛋白家族有3位成员,分别是TET1、TET2和TET3。TET蛋白氧化5-m C生成5-hmC,后者进一步被转化为5-甲酰胞嘧啶(5-formylcytosine,5-fC)和(或)5-羟基胞嘧啶(5-carboxylcytosine,5-caC)。遗传学研究表明TET蛋白家族成员通过修饰DNA去甲基化,在基因组DNA主动去甲基化过程中发挥重要作用。因此,TET蛋白家族参与生物生长发育,与多种疾病发生有密切关系。近年来,随着对TET蛋白家族和5-hmC生物学功能的深入认识,TET蛋白家族在肿瘤发生发展中的作用亦受到重视。胃癌起源于胃黏膜上皮,是危害人类健康的常见恶性肿瘤之一。胃癌的发生是一个多因素、多步骤的过程。胃癌发生与环境和饮食因素、幽门螺旋杆菌感染、遗传因素等相关。近年来,胃癌发生过程中表观遗传学修饰所扮演的角色成为科研工作者研究的重点方向。虽然早有文献表明,基因转录可以被异常甲基化作用,从而促进基因突变,增加染色体结构的不稳定性等多重机制促进胃癌的发生发展,但是TET蛋白家族在胃癌发生发展中的全面和确切的作用仍不清楚。本研究检测TET蛋白家族成员在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌进展的相关性,为进一步认识异常表观遗传事件促进胃癌发生发展的分子机制奠定了初步基础。研究目的检测TET蛋白家族在胃癌及癌旁组织中的表达情况,分析其表达与分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移等胃癌临床病理特征的关系,以及胃癌组织TET表达水平与患者预后的相关性。进一步检测胃癌组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量,分析TET2与E-cad表达水平的相关性,探讨TET2是否与胃癌转移相关,为胃癌的分子靶向治疗和预后评估提供新的思路。研究方法实验分组:胃癌组织及胃癌癌旁组织两组。实验步骤:he染色再次明确石蜡标本胃癌诊断后,肿瘤及部分癌旁区域制备组织芯片。运用免疫组化技术,检测上述组织中tet蛋白家族和e-cad的表达情况,由两位病理医师根据免疫组化积分打分法(immnohistochemicalsemi-quantitativeremmelescoringsystem,irs)对染色结果分别进行评分,即:免疫组化染色的评分同时考虑免疫反应染色强度(stainingintensity,si)和阳性细胞百分比(positivepercent,pp)。si分值:0分为未见阳性细胞,1分为细胞阳性染色最强处呈现弱阳性,2分为阳性,3分为可见强阳性染色的细胞;pp分为5级:0分为无染色阳性区域,1分为阳性染色区域≤10%,2分为阳性区域介于11%~50%,3分51%~80%,当阳性染色区域>80%时为4分。ihc得分=si×pp。最后按得分将结果区分为高表达与低表达两组:低表达即0≤积分≤4分,评分>4分为高表达。对本组胃癌患者进行术后随访,获取患者基本资料、相关临床治疗方案及预后信息。分析tet蛋白家族、e-cad表达量与胃癌患者临床病理参数及预后的关系,探讨tet2与e-cad表达的相关性。研究结果1.获取胃癌癌旁组织29例及胃癌组织100例。免疫组化检测tet蛋白家族表达情况,发现tet蛋白家族在胃癌中的表达相较于癌旁组织表达下降(均p<0.05)。2.tet1蛋白表达与胃癌分化、tnm分期有关(均p<0.05);tet2表达与肿瘤的直径、分化程度、淋巴结转移、tnm分期有关(p<0.05);tet3在胃癌组织中的表达仅与患者是否存在淋巴结转移有关(p<0.05)。3.tet1和tet3蛋白在胃癌组织中的表达与胃癌患者预后无关(均p>0.05);tet2蛋白的表达与胃癌预后相关(p<0.05),tet2高表达的患者总生存期长于tet2低表达(p<0.05)。4.相较于胃癌癌旁组织,e-cad在胃癌中的表达下降,其表达与胃癌分化、淋巴结转移、tnm分期有关(p<0.05)。5.分析tet2、e-cad与无转移生存时间的关系,tet2蛋白、e-cad低表达患者无转移生存时间短于其高表达的患者。其差异具有统计学意义(均p<0.05)。6.胃癌组织中tet2与e-cad表达呈显著的正相关性(p<0.01)。tet2高表达的病例中,有65.4%的组织e-cad也呈高表达;tet2低表达的病例中,有90.5%的患者e-cad低表达。研究结论1、相较于胃癌癌旁组织,TET蛋白家族在胃癌组织中表达降低,TET的表达与胃癌临床病理特征密切相关,提示TET蛋白家族参与胃癌演进;2、TET2在胃癌中高表达患者的生存率高于低表达患者,提示TET2的表达与胃癌预后相关;3、TET2和E-cad在胃癌组织中的表达呈显著正相关,且与胃癌无转移生存期相关,提示TET2可能参与了胃癌转移。