论文部分内容阅读
本论文用硫辛酸接枝的聚乙二醇-b-聚（N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺）嵌段聚合物（PEG-b-PHPMA-LA）制备了还原敏感的核可逆交联的聚合物胶束。该胶束核中的硫辛酸在催化量DTT的作用下，硫硫键部分断开并重新形成新硫硫键，使胶束核发生交联。核交联的胶束在高倍稀释、浓盐条件下具有很高的稳定性，但在模拟细胞内的还原环境中很快解离，高效快速的释放出药物，达到治疗效果。为了提高载药胶束的靶向性，我们在PEG-b-PHPMA-LA聚合物中引入了不同量的含半乳糖靶向分子的聚乙二醇-聚己内酯聚合物（Gal-PEG-PCL，含量：0～20wt.％），在水中自组装形成混合胶束。混合胶束相似地可在在催化量DTT的作用下发生核交联，从而得到具有高稳定性和高靶向性的混合胶束。 （1）通过RAFT聚合反应，以PEG-CPADN（Mn,PEG=5.0kg/mol,CPADN:二硫代萘甲酸-（4-氰基）戊酸酯）为大分子RAFT试剂合成了水溶性的嵌段聚合物聚乙二醇-b-聚（N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺），即PEG-b-PHPMA。核磁氢谱和凝胶色谱测试显示PHPMA具有可控的分子量（1.7，4.1，7.0kg/mol）且分子量分布低（1.17-1.25）。然后，通过酯化反应把硫辛酸接到聚（N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺）链段的羟基上，从而得到两亲性聚合物聚乙二醇-b-聚（N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺）-硫辛酸,即PEG-b-PHPMA-LA，它们的取代度（DS）为71-86%。在水溶液中PEG-b-PHPMA-LA形成胶束的粒径在85.3-142.5nm之间，临界胶束浓度为8.0-2.0mg/L。加入催化量（10mol.%硫辛酸官能团）的DTT，对胶束核进行交联。交联后的胶束在稀释、生理浓度盐溶液的条件下仍然很稳定，但在类细胞内的还原环境（10mMDTT）下，聚合物胶束很快解交联。PEG-b-PHPMA(7.0k)-LA聚合物胶束对阿霉素的载药量为27wt.%，载药效率达90%。体外释放研究表明，交联的载阿霉素的PEG-b-PHPMA(7.0k)-LA聚合物胶束在生理条件下，24小时仅释放了22.0%的阿霉素；而在10mMDTT的还原性环境下，24小时后释放了90.1%。MTT实验结果显示，载阿霉素的核交联胶束在HeLa细胞中显示了增强的抗肿瘤细胞效果，48小时以后的半致死浓度为6.7μgDOXequiv./mL，而空胶束当其浓度达到1.0mg/mL时仍然没有毒性。共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察结果显示，载阿霉素的核交联胶束在与HeLa细胞孵育了12小时后，即可以将阿霉素输送到细胞核内。 （2）论文第三章主要研究了表面半乳糖（Gal）修饰的、核可逆交联的新型生物可降解聚合物胶束用于阿霉素的肝癌靶向释放。该胶束由聚乙二醇-b-聚（N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺）-硫辛酸（PEG-b-PHPMA-LA）、偶联半乳糖的聚乙二醇-聚己内酯（Gal-PEG-PCL）两种聚合物组成。Gal-PEG-PCL中的PEG链段较PEG-PAC-PCL聚合物中的分子量高，从而使Gal充分裸露在胶束表面，提高胶束的靶向性。在水溶液中PEG-b-PHPMA(7.0k)-LA/Gal-PEG-PCL（Gal-PEG-PCL含量为0-20wt.%）形成靶向性胶束，胶束的粒径在142.5-201.2nm之间。加入催化量（硫辛酸官能团10mol.%）的DTT后得到核交联的胶束。该胶束在稀释、生理浓度盐溶液中很稳定，但在类细胞内的还原环境（10mMDTT）下，聚合物胶束很快解交联。PEG-b-PHPMA(7.0k)-LA/Gal-PEG-PCL（Gal-PEG-PCL含量为20wt.%）的聚合物胶束对阿霉素的载药量为22.0wt.%，载药效率为73%。体外释放研究表明，交联的载阿霉素PEG-b-PHPMA(7.0k)-LA/Gal-PEG-PCL（Gal-PEG-PCL含量为20wt.%）聚合物胶束在生理条件下，24小时仅释放了25.6%的阿霉素，而在10mMDTT的还原性环境下，24小时后释放了87.5%。MTT试验结果表明，含Gal的载药交联胶束对肝癌细胞HepG2（表面过度表达去唾液酸糖蛋白受体，ASGPR）的抗癌效率，比不含Gal的载药交联胶束和含Gal的载药未交联胶束都要高。