论文部分内容阅读
类风湿性关节炎(Rheumatoid Artlhritis,RA)是一种以关节慢性炎症、滑膜组织增生和软骨、骨的侵蚀性破坏为主要表现的全身性疾病,具有较高的发病率和致残率。因其病因和发病机理尚未阐明,临床上只能对“症”治疗,包括免疫抑制和抗炎,虽能缓解病情但不能终止病情发展。尽管IL-1 β和TNF-α拮抗剂的产生为RA的治疗带来了革命性变化。遗憾的是,以IL-1β和TNF-α为治疗靶标的策略仅能使40%的病人达到ACR50标准,对20-40%病人并没有疗效[1,2]。因此,探索RA发病机制,寻找新的RA调控基因和干预靶点仍是目前亟待解决的难题。众所周知,外界的刺激因素(例如细胞因子、病毒和细菌蛋白等)作用于靶细胞后,必须通过特定的信号通路才能激活细胞,引起细胞产生相应的生化反应,最终在RA的启动和病程的维持中产生效应。因此若能发现这些信号通路中发挥关键作用的分子,明确其在RA发病中的调控作用,则可能为RA的治疗提供新的思路。NRAGE(neurotrophin receptor-interacting MAGE homo log)又名 MAGED1 和Dlxin-1,隶属于MAGE(黑色素瘤抗原)家族。该分子是一个胞质内多功能的分子脚手架蛋白,位于多条信号通路的节点,可通过调控不同的信号通路来影响细胞增殖和凋亡、炎症反应(本实验室前期研究,尚未发表,见李豪杰论文)和破骨细胞分化(本实验室前期研究,见本课题组许丽娟论文)等多个生理病理过程。需要注意的是,如前文所述,类风湿性关节炎关节炎最为典型的病理学特征即表现为节慢性炎症、滑膜组织增生和骨组织的侵蚀性破坏,因此,我们提出:NRAGE是否参与调控了类风湿性关节炎的发生发展过程?为此,我们建立了Ⅱ型胶原诱导的关节炎(typeⅡ collagen-inducedarthritis,CIA)大鼠模型,并在RNA和蛋白水平检测了NRAGE在CIA大鼠中的表达情况;利用NRAGE基因敲除小鼠,通过胶原抗体诱导的小鼠模型,进一步确认NRAGE对RA的调控作用。论文主要内容如下:1.检测NRAGE基因在CIA大鼠中的表达情况;2.建立NRAGE基因敲除小鼠CAIA模型,进一步明确NRAGE对类风湿性关节炎的调控作用。主要实验内容和结果如下:1、建立CIA大鼠模型,检测NRAGE基因在大鼠CIA模型中的表达本实验采用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂皮内注射的方法建立了大鼠CIA模型,通过RT-PCR和免疫组化的方法分别从RNA和蛋白水平检测了 NRAGE在CIA大鼠中的表达情况,结果表明,NRAGE基因在正常大鼠滑膜中检测到表达,且在CIA模型组大鼠滑膜中的表达量明显高于正常大鼠,提示NRAGE基因可能正调控类风湿性关节炎的发病过程。2、利用NRAGE基因敲除小鼠建立CAIA模型,明确NRAGE在类风湿性关节炎中的作用我们采用胶原抗体诱导的方法对野生型和NRAGE基因敲除型小鼠进行关节炎的诱导,并通过关节炎指数评分,足爪厚度测量和病理学切片等方法全面比较了两种基因型小鼠的发病情况。结果发现,无论在发病率还是发病严重程度上敲除型小鼠都要明显低于野生型小鼠,进一步明确了 NRAGE基因对RA的正调控作用,即该基因缺失对RA的保护作用。主要结论:1.NRAGE在CIA模型大鼠中表达量明显高于正常大鼠,提示NRAGE在类风湿性关节炎种可能起正调控作用。2.外观及组织切片染色表明,NRAGE基因敲除组小鼠减轻了 CAIA法诱导的小鼠类风湿性关节炎的发病,进一步明确了 NRAGE对RA的正调控作用。