【摘 要】
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在过去的二十年里,由于新烟碱类化合物的大规模应用,环境中新烟碱的残留量大大增加。大量的新烟碱进入水体、土壤以及食物链,对人和动物造成严重的危害。因此,新烟碱类农药的过度使用问题日益瞩目。其中,噻虫啉(Thiazoline,THI)是一种有代表性的新烟碱类农药。该产品优点为对多种害虫起效、起效速度快、效率突出并且效用持久。其防治领域包括多种水果蔬菜以及茶叶等常见农作物。对于特定的蜂类和蚜虫类,效果尤
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在过去的二十年里,由于新烟碱类化合物的大规模应用,环境中新烟碱的残留量大大增加。大量的新烟碱进入水体、土壤以及食物链,对人和动物造成严重的危害。因此,新烟碱类农药的过度使用问题日益瞩目。其中,噻虫啉(Thiazoline,THI)是一种有代表性的新烟碱类农药。该产品优点为对多种害虫起效、起效速度快、效率突出并且效用持久。其防治领域包括多种水果蔬菜以及茶叶等常见农作物。对于特定的蜂类和蚜虫类,效果尤为明显。既可以用于浸泡种子也可以用于茎、叶的处理。然而,THI的大量使用已经造成了一系列的环境问题,甚至影响到人类的食品卫生安全。已有研究证明,THI会诱导机体的氧化应激、炎症反应、细胞凋亡和DNA损伤等。天然草本植物石斛从古至今都发挥着重要药用价值,尤其铁皮石斛作为石斛中的珍稀品种,在2015年被正式认定为是一种宝贵的国家重点保护的传统中药。其多糖提取物更是被证明具有不菲的免疫调节功能。铁皮石斛多糖(Dendrobium polysaccharides,DOP)是一种从铁皮石斛中提取出的天然活性物质,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡和降血糖活性等多种功效。与此同时,肺脏作为体内重要的气体交换器官,主导着机体的呼吸功能,还充当着心脏的保护伞。目前,农药对肺脏的毒性作用已在多份研究报告中得到证明,其中一个关键的毒理学途径便是氧化应激。在发生氧化应激时,肺脏的内环境也随之变化,造成免疫失调,引发病变。基于上述研究背景,我们以对农药毒性极其敏感的日本鹌鹑作为试验模型,旨在探究THI对肺脏的毒性作用机制,并观察DOP是否可能作为一种治疗用药以缓解THI造成的肺脏中毒。根据上述背景,我们设计了如下试验:该试验分为两个部分:首先建立鹌鹑THI肺脏中毒模型。选取28只28日龄体重为85g±15g的健康雄性鹌鹑,随机分成4组,每组7只,分别为对照组(生理盐水)、低剂量组(2 mg/kg THI)、中剂量组(4 mg/kg THI)和高剂量组(6 mg/kg THI)。试验期间自由饮食,控制温度在23-27℃,湿度保持在约50%,每日一次灌胃给药,试验周期为35天。处死后立即取血进行红细胞和白细胞计数,使用超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)试剂盒、丙二醛(Methane dicarboxylic aldehyde,MDA)试剂盒和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)试剂盒检测肺脏抗氧化应激水平。试验结果结合组织病理学分析显示,THI造成了鹌鹑肺脏的氧化应激和炎症,并且损伤程度随着THI剂量的升高而加剧。试验第二部分是用DOP干预THI导致的肺脏损伤并探究其具体机制。选取28只28日龄体重为85 g±15 g的健康雄性鹌鹑,随机分成4组,每组7只,分别为对照组(生理盐水),THI组(4 mg/kg THI),THI+DOP组(4 mg/kg THI+200 mg/kg DOP)和DOP组(200 mg/kg DOP)。试验期间自由饮水和采食,控制温度在23-27℃,湿度在50%左右,每日一次灌胃给药,试验周期为35天。处死后取出肺脏组织进行以下试验:血液红细胞以及白细胞计数;组织SOD、MDA、GSH以及羟脯氨酸指标检测肺脏氧化应激水平和纤维化程度;组织病理学分析肺脏病理变化;并运用免疫印迹法和荧光定量PCR进行肺脏损伤的信号通路的验证。综合鹌鹑的血液检测、病理学分析、试剂盒检测以及分子生物学检测结果推断,THI对鹌鹑肺脏造成氧化应激损伤,引发炎症、凋亡和纤维化,并呈剂量依赖性。而DOP对THI诱导的鹌鹑肺脏氧化应激、炎症、凋亡和纤维化,均起到缓解作用。相关基因和蛋白如高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein,HMGB1)以及核因子E2相关因子(Nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)的表达水平证明DOP可能通过激活Nrf2通路,提高机体的抗氧化能力,下调HMGB1的表达水平从而缓解了THI诱导的鹌鹑肺脏纤维化。综上所述,DOP可能作为一种天然性治疗用药以保护鹌鹑的生产性能和减轻THI诱导的氧化应激损伤。
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