犬细小病毒(CPV)分类上属自主复制的细小病毒科(Parvoviridae)，细小病毒属(Parvovirus)，是多种猫科和犬科动物的重要病原。本文从患犬细小病毒病的犬肠道、心脏、肺和肝制备病毒液，用感染了病毒的细胞提取病毒基因组做模板，并根据Genbank数据库公布的同源序列设计了特异性引物，采用PCR方法扩增出了目的片段，将PCR产物测序和分析，证实获得犬细小病毒新强毒株CPV-HN3的VP2基因。VP2基因中仅有一个开放读码框(Open Reading Frame，ORF)编码VP2蛋白，是犬细小病毒的主衣壳蛋白，推测编码548个氨基酸。此开放读码框以ATG为起始密码子，终止密码子为TAA。编码区全长1755bp，GC含量35.78％，由584个氨基酸组成，分子量为64.5kDa。根据同源性比较和系统进化分析，CPV-HN3属于CPV-2b型成员。 将CPV-HN3的CPV-HN3的VP2基因，连接到真核表达载体pcDNA3.0载体上，构建了核酸疫苗pcDNA-VP2，皮下注射犬后，诱导了免疫应答反应，犬血清中的特异性抗犬细小病毒抗体可达1：12800，在攻毒实验中，注射核酸疫苗pcDNA-VP2的犬能抵抗住致死剂量的犬细小病毒攻击，发病率和死亡率都为0，证明了核酸疫苗pcDNA-VP2可做为犬细小病毒疫苗的候选者。 将CPV-HN3的CPV-HN3的VP2基因进行定点突变后，连接到原核表达载体pMAL-c2x上，构建了重组表达载体pMAL-c2x-VP2，将其转化大肠杆菌TB1进行融合表达，融合蛋白分子量约为107kDa。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定，证实了重组大肠杆菌表达了犬细小病毒VP2蛋白，表达的融合蛋白主要以可溶形式存在，经亲和层析纯化蛋白，纯化度达90％以上。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔子，血清中特异性抗犬细小病毒抗体效价达1：32000，中和抗体效价达1：320. 用磷酸铝作为佐剂，分别与核酸疫苗pcDNA-VP2和融合蛋白混和，皮下注射犬后，磷酸铝佐剂提高了pcDNA-VP2和融合蛋白的免疫效果，同时接种pcDNA-VP2和融合蛋白的犬，在攻毒实验中都抵抗住了致死剂量的犬细小病毒的攻击，发病率和死亡率为0。