【摘 要】
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目的:研究RhoA信号通路在人腰椎间盘退变组织中表达,并在体外培养的人髓核细胞中探讨RhoA信号通路的上调和抑制对其下游因子ROCK2表达和髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖的影响,以分析该信号通路的变化在椎间盘退变的作用和机制,为延缓椎间盘退变方法的探索提供实验基础。方法:收集2020年6月-2021年1月青岛大学附属医院行腰椎手术治疗椎间盘突出的青年组（25-30岁）中年组（45-50岁）及老年组（6
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目的:研究RhoA信号通路在人腰椎间盘退变组织中表达,并在体外培养的人髓核细胞中探讨RhoA信号通路的上调和抑制对其下游因子ROCK2表达和髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖的影响,以分析该信号通路的变化在椎间盘退变的作用和机制,为延缓椎间盘退变方法的探索提供实验基础。方法:收集2020年6月-2021年1月青岛大学附属医院行腰椎手术治疗椎间盘突出的青年组（25-30岁）中年组（45-50岁）及老年组（65-70岁）患者的椎间盘髓核组织各23例,应用免疫组织化学方法分别检测各组髓核组织中的RhoA、ROCK2、Ⅱ型胶原含量,用番红O固绿染色检测各组髓核组织中的蛋白多糖表达;13例（16-20岁）患者的椎间盘髓核组织,分离髓核细胞并进行培养和传代;取生长状态良好的二代髓核细胞作为实验用细胞。设立对照组:二代髓核细胞;血管紧张素组:二代髓核细胞中加入血管紧张素Ⅱ;血管紧张素+抑制剂组:二代髓核细胞中加入血管紧张素Ⅱ+RhoA信号通路抑制剂Y-27632。三组细胞培养24小时、48小时、72小时后,用q PCR检测各组、各个时间点细胞中RhoA、ROCK2、Ⅱ型胶原以及蛋白多糖mRNA的表达水平的变化。再应用Western-blot法来检测各组RhoA、ROCK2、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达量。观察在椎间盘退变过程中,RhoA信号通路的变化对Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响。进行统计学处理,P<0.05则说明结果具有统计学差异。结果:免疫组化检测结果显示:青年组、中年组、老年组RhoA、ROCK2的表达量依次增多,Ⅱ型胶原表达量逐渐减少,青年组较中年组、中年组较老年组具有统计学差异（P<0.05）;番红O固绿染色结果示随着年龄的增长,蛋白多糖的表达量逐渐减少,髓核退变程度逐渐加重;提示RhoA信号通路的上调与Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达量的减少有关。体外培养髓核细胞q PCR结果显示:作用24小时后,对照组、血管紧张素组和血管紧张素+抑制剂组的RhoA、ROCK2、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达无显著差异（P>0.05）,作用48、72小时后,对照组、血管紧张素+抑制剂组RhoA、ROCK2的表达均显著小于血管紧张素组,对照组、血管紧张素+抑制剂组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达均显著大于血管紧张素组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western-blot结果显示:对照组、血管紧张素+抑制剂组RhoA、ROCK2的表达均较显著小于血管紧张素组,在Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达方面,对照组、血管紧张素+抑制剂组均显著大于血管紧张素组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:在椎间盘退变过程中髓核细胞中RhoA通路上调促使下游因子ROCK2表达增加,使Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达减少;血管紧张素Ⅱ可促进椎间盘髓核细胞的退变,RhoA信号通路的抑制可下调髓核细胞ROCK2表达,促使Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达量增加。结果表明RhoA信号通路的调控影响了髓核细胞代谢功能,为椎间盘退变的治疗研究提供了新的思路。
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