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黑水缬草为败酱科缬草属(Valeriana L.)植物,有镇静宁心、理气和止痛的功效,常与其他药材配伍使用。本课题组前期研究首次发现黑水缬草具有显著的抗阿尔茨海默病(AD)的活性,确定了抗-AD的有效部位为黑水缬草95%乙醇提取物的大孔吸附树脂柱色谱的50%EtOH洗脱组分(AD-EFV),并进一步发现木脂素成分具有较强的神经细胞保护作用。为揭示黑水缬草木脂素成分吸收和分布的特征,给药物质量控制和临床应用提供数据参考,本次研究将对黑水缬草木脂素成分定性定量分析和药物动力学进行系统的研究。主要的研究内容包括:1.黑水缬草木脂素成分定性定量分析方法的建立采用UPLC-MS/MS技术建立黑水缬草提取物中9个木脂素成分的定性定量方法。色谱柱为 CSH Fluoro-Phenyl(150mm×2.1mm,1.7μm),流动相为含有0.1%甲酸的乙腈-水,梯度洗脱,0.2mL/min的流速;质谱条件为:ESI源,扫描方式为多反应监测(MRM)模式,负离子扫描。以保留时间和定性离子对之间的相对丰度定性,以定量离子对峰面积定量。实验结果9个木脂素成分8,8’-二羟基松脂素(DH)、(+)-梣皮树脂醇-4,4’-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(MDG)、青刺尖木质醇苷(PG)、(+)-松脂素-4,4’-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(PDG)、(+)-紫丁香-4,4’-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(SG)、(+)-8-羟基-松脂素-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(H4’G)、左旋马尾松树脂醇-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(MG)、8,8’-二羟基-松脂素-4,4’-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(DG)、(+)-8-羟基-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(H4G)在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,仪器精密度(RSD)<4.91%,重复率(RSD)在1.80%～2.94%之间,回收率在94%～104%之间。该方法分析速度快、效率高、线性好、灵敏度高、检测限低,能够满足实验要求,并将该方法应用于10批黑水缬草药材中木脂素成分的定性定量检测。2.黑水缬草木脂素成分在大鼠体内的药物动力学研究采用UPLC-MS/MS技术建立黑水缬草木脂素成分在大鼠血浆样品中的定量分析方法。色谱柱为 Waters ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm,1.7μm),流动相为含有0.1%甲酸的乙腈-水,梯度洗脱,0.3mL/min的流速;质谱条件为:ESI源,扫描方式为多反应监测(MRM)模式,负离子扫描。(+)-8-羟基-松脂素-4’-O-p-D-吡喃葡萄糖苷(HG)、青刺尖木脂醇苷(PG)、松脂素-4,4’-二-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(PDG)、左旋马尾松树脂醇-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(MG)4个木脂素化合物和4-羟基苯甲酸乙酯(IS)被监测的离子对分别为 535.2/373.1、551.3/389.3、681.3/357.1、553.4/357.2、165.2/92.0。结果4个木脂素化合物的线性范围(ng/mL)分别为0.39～154.0、0.62～244.7、0.50～134.5、0.34～198.7,日间和日内精密度(RSD)低于14.46%,准确度(RE)在-5.87%～12.30之间,分析物在大鼠血浆中的提取回收率均超过81.10%。该方法应用到大鼠口服给药黑水缬草提取物后的药物动力学研究。药物HG、PG、PDG、MG的T1/2(h)在2.13～3.00之间,Tmax(h)在 0.58～0.67 之间,Cmax(ng/mL)分别为 27.33±5.32、33.54±6.18、9.85±1.88、24.95±7.05。3.黑水缬草木脂素成分在大鼠体内的组织分布研究采用UPLC-MS/MS技术建立黑水缬草木脂素成分在大鼠各组织样品中的定量分析方法。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm,1.7μm),流动相为含有0.1%甲酸的乙腈-水,梯度洗脱,0.3mL/min的流速;质谱条件为:ESI源,扫描方式为多反应监测(MRM)模式,负离子扫描。该方法应用到大鼠口服给药黑水缬草提取物后的组织分布研究。于给药后0.5、1、1.5、2和2.5h,摘取心、肝、脾、肺、肾及脑组织样品,检测药物HG、PG、PDG、MG在各组织脏器中的浓度。结果表明,4个木脂素成分在心、肝、脾、肺、肾及脑组织中均有分布,从整个分布情况来看,在脾组织中的含量相对较高,其次是肝脏和肺脏,4个成分均可通过血脑屏障。本次研究对黑水缬草中抗-AD的9个活性成分建立了快速、高效的多组分同时定性定量的分析方法,并将该方法应用到10批黑水缬草药材中木脂素成分的检测,为药材的质量控制提供相关的方法依据。建立黑水缬草木脂素成分在生物样品中的快速定量分析方法,并将该方法应用到黑水缬草提取物在大鼠体内的药物动力学特征的研究,为药物黑水缬草在抗-AD的临床化应用中制定给药次数、给药剂量及其使用方法提供了重要的依据。