本研究将蜂胶和黄芪多糖复配,以纳米乳为载体,制备出一种复方蜂胶纳米乳佐剂,目的在于改良常规油佐剂存在的问题。通过对该新型佐剂稳定性、安全性和免疫效力考察,为该佐剂在预防兽医中的应用提供理论依据。第一部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的制备及其质量评价。利用伪三元相图法筛选处方,以RH-40、无水乙醇、乙酸乙酯、蜂胶和黄芪多糖为原料制备了复方蜂胶纳米乳,并对其结构类型、形态粒径、黏度、稳定性进行考察。结果表明:复方蜂胶纳米乳透射电镜下呈球形,平均粒径为12.70 nm,PDI为0.188,粒径分布均匀;黏度为2s·0.4 mL-1;该制剂体系稳定。复方蜂胶纳米乳佐剂制备工艺简单、稳定性好、黏度低,符合生物制品质量检验的要求。第二部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的安全性评价。本研究采用急性经口毒性试验、急性眼刺激试验、肌肉刺激性试验、热原试验和细胞毒性试验考察了复方蜂胶纳米乳佐剂的安全性。结果表明:复方蜂胶纳米乳佐剂LD50>5000 mg/kg,属实际无毒;复方蜂胶纳米乳佐剂对眼和肌肉均无刺激性;热原试验表明,复方蜂胶纳米乳佐剂符合规定;复方蜂胶纳米乳佐剂稀释100倍以上无细胞毒性。复方蜂胶纳米乳佐剂安全性高,对活体无刺激,符合生物制品安全检验的要求。第三部分:复方蜂胶纳米乳佐剂灭活苗的制备及攻毒保护试验。本研究制备出复方蜂胶纳米乳佐剂-H9亚型禽流感病毒灭活苗,并对该疫苗进行了质量和安全性评价,同时进行了攻毒保护试验。结果表明,该灭活疫苗的制备采用直接配苗法,简单易操作;质量评价结果显示,蜂胶外观澄清透明,结构类型为O/W型;高速离心试验5000r/min,离心30min,无破乳现象发生;黏度测定2.5s·0.4 mL-1;无菌检验符合规定;安全检验结果显示,抗原灭活彻底,无血凝活性,疫苗接种鸡只无不良反应;攻毒保护率100%。新型禽流感灭活疫苗物理性状稳定、黏度适宜注射、安全可靠,为该佐剂在生产实践中的应用提供可靠依据。第四部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的免疫效力研究。本章在前期工作基础上,通过HA-HI和MTT淋巴细胞转化试验考察复方蜂胶纳米乳佐剂-H9亚型禽流感灭活苗的体液免疫水平和细胞免疫水平。结果显示:当佐剂中蜂胶浓度达到15mg/mL时,复方蜂胶纳米乳佐剂疫苗免疫效果显著,能够诱导较高的抗体水平,并能有效激活机体的细胞免疫应答;与白油疫苗组相比,该新型疫苗免疫后产生抗体时间更早、滴度更高;淋转试验结果显示,复方蜂胶纳米乳佐剂灭活苗细胞免疫产生迅速,细胞免疫水平高于白油疫苗组、抗原对照组。由此可见,复方蜂胶纳米乳佐剂具有广阔的开发前景。