恩诺沙星(ENR)为动物专用的广谱抗菌药,本实验室以明胶为包材采用单凝聚法制备出了恩诺沙星明胶微囊(EMS),为明确EMS含量的测定方法、体外释放特性、稳定性及动物体内转运特点,通过恩诺沙星明胶微囊含量测定方法的建立及验证、恩诺沙星明胶微囊体外释放度测定、恩诺沙星明胶微囊稳定性试验、恩诺沙星明胶微囊在瘤胃中的稳定性试验和恩诺沙星明胶微囊药效学试验,建立了 EMS含量测定的紫外分光光度法(UV)和高效液相色谱法(HPLC);测定了 EMS在酸中及缓冲液中药物释放度;考察了高温、高湿和强光照对EMS稳定性的影响,并对其稳定性进行了测定;考察了恩诺沙星明胶微囊在瘤胃中的稳定性,最终选用猪作为靶动物,进行了 EMS靶动物体内的药代动力学研究。结果表明:(1)建立的测定EMS含量的紫外分光光度法(在270nm处测定)及HPLC法(色谱柱:4.6*250mm、5μm的C18柱;流动相:0.025mol/L磷酸:乙腈=83:17;检测波长为278nm;柱温:25℃)的专属性、线性、精密度及准确度均符合要求,说明两种方法均可以用于测定EMS的含量。(2)ENR酸中2h累积释放度达到81.63%,而EMS酸中2h累积释放度仅为9.07%;2h后继续在pH6.8的缓冲液中测定药物释放度,0.5h时ENR溶出90%以上,36h EMS释放度达到93.83%,说明EMS比ENR在酸中更稳定,且EMS在pH6.8的缓冲液中有明显的缓释作用;将得到的EMS释药数据与一级方程和Higuchi方程进行拟合,结果显示EMS的释药曲线与一级方程的相关性最高,得到的释药方程为In(1-Mt/M∞)=-0.0858t+4.819,r=0.970,t90 为 29.32h。(3)EMS在60℃高温条件下放置10d,其药物含量减少了 5%以上;在40℃条件下10d后,EMS载药量减少了 0.8%<5%;在高湿(RH90%±5%、75±5%)条件下放置10d,EMS吸湿增重均超过5%;强光照条件下放置10d,EMS颜色由棕黄色变为浅黄色,载药量减少了 0.684%<5%,说明EMS对高温、高湿及光照均敏感,其应保存于阴凉、避光、干燥处。(4)经过为期6个月的加速试验和长期试验,EMS性状(微囊颜色、形态)未发生明显变化,三批微囊载药量变化(2.261%、1.911%、2.629%)、释放度变化(0.657%、0.748%、0.286%)均低于5%,根据加速试验(40±2℃)结果得到EMS保存时间-药物含量曲线图,推算出EMS有效期为1.14年。(5)随恩诺沙星明胶微囊在牛瘤胃内停留时间的延长,其释放率逐渐增高,24h的降解率达到78%,表明恩诺沙星明胶微囊在牛瘤胃内稳定性较差。(6)建立了猪血液样品中恩诺沙星含量测定HPLC法(色谱柱:C18,5μm,4.6 mm×250mm;流动相:乙腈:0.1mol/L磷酸=20:80;流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:50μL),使用乙腈萃取血液中的恩诺沙星,经试验,此方法专属性、线性、检测限(LOD)及定量限(LOQ)、精密度、回收率均符合试验要求,可以用于测定猪血浆中恩诺沙星。(7)EMS给猪灌服后,吸收半衰期t1/2ka为1.007±0.069h,消除半衰期t1/2β为4.975±0.252h,达峰时间tmax为3.034±0.162h,药时曲线下面积AUC为25.860±1.039μg-h/mL,生物利用度 F 为 99.75±0.108%,峰浓度 Cmax 为2.359±0.0248μg/mL,与恩诺沙星原料药的 t1/2ka(0.432±0.069h)、t1/2β(2.619±0.069h)、tmax(1.354±0.125h)、AUC(15.531±0.790μg·h/mL)、F(97.155±2.404%)、Cmax(2.823±0.096μg/mL)相比,分别增加了 133.10%、89.96%、124.08%、66.51%、2.67%,降低了 16.44%,说明EMS在猪体内的吸收、消除过程显著延长,可以达到缓释的效果,且提高了生物利用度。