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目的探讨RHBDF2在子宫内膜癌病人中的表达及临床相关性,并在细胞水平过表达/下调RHBDF2,观察子宫内膜癌细胞侵袭转移及上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并进一步探讨RHBDF2通过Pkmyt1介导YAP1通路对子宫内膜癌侵袭转移及EMT的影响,从而为阐明RHBDF2调控子宫内膜癌的机制提供理论依据。方法一、RHBDF2调控子宫内膜癌细胞的侵袭转移和EMT1、生物信息学分析RHBDF2 m RNA在子宫内膜癌患者中癌和癌旁组织中的表达差异及其与临床相关性和患者生存预后的关系。2、选取四种子宫内膜癌细胞株HEC-1-B、Ishikawa、RL95-2和AN3CA进行培养,Western blotting检测RHBDF2蛋白的基础表达;分别在HEC-1-B和AN3CA中下调和过表达RHBDF2,进行CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验。3、Western blotting法检测下调或过表达RHBDF2后,观察EMT标志物（Snail1、N-cadherin、E-cadherin）表达的情况。二、RHBDF2通过YAP1通路调控子宫内膜癌细胞的侵袭转移和EMT1、生物信息学预测子宫内膜癌组织中RHBDF2和YAP1的蛋白表达。2、Western blotting法检测下调或者过表达RHBDF2后YAP1表达。3、在子宫内膜癌细胞过表达RHBDF2后加入YAP1抑制剂Ca3后,进行CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验;Western blotting法检测EMT标志物的表达情况。三、RHBDF2通过上调Pkmyt1调控YAP1通路1、生信分析预测RHBDF2和Pkmyt1在子宫内膜癌组织中的表达相关性;Western blotting法检测下调或者过表达RHBDF2后Pkmyt1表达。2、选取四种子宫内膜癌细胞株HEC-1-B、Ishikawa、RL95-2和AN3CA进行培养,Western blotting检测Pkmyt1蛋白的基础表达;分别在RL95-2和AN3CA中下调和过表达Pkmyt1,进行CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验。3、Western blotting法检测下调或过表达Pkmyt1后,观察EMT标志物（Snail1、N-cadherin、E-cadherin）的表达。4、在子宫内膜癌细胞下调RHBDF2后过表达Pkmyt1或过表达RHBDF2后下调Pkmyt1,进行CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验;Western blotting法检测EMT标志物的表达。5、在子宫内膜癌细胞过表达RHBDF2后下调Pkmyt1,Western blotting法检测YAP1的表达情况。结果一、RHBDF2调控子宫内膜癌细胞的侵袭转移和EMT1、与癌旁组织相比,在子宫内膜癌组织中RHBDF2 mRNA表达上调（P＜0.05）;RHBDF2高表达与子宫内膜癌的临床分级和组织类型显著相关（P＜0.05）;RHBDF2高表达患者总生存率显著降低（P＜0.05）。2、CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验的结果显示,在HEC-1-B细胞中敲减RHBDF2抑制细胞迁移和侵袭,在AN3CA细胞中过表达RHBDF2促进细胞增殖、迁移和侵袭。3、Western blotting结果表明,在HEC-1-B细胞中敲减RHBDF2后,上皮细胞标志物E-cadherin蛋白表达增加（P＜0.05）,间质细胞标志物N-cadherin、Snail蛋白表达减低（P＜0.05）,即敲减RHBDF2抑制细胞EMT;在AN3CA细胞中过表达RHBDF2后,E-cadherin蛋白表达减低（P＜0.05）,N-cadherin、Snail1蛋白表达增加（P＜0.05）,即过表达RHBDF2促进细胞EMT。二、RHBDF2通过YAP1通路调控子宫内膜癌细胞的侵袭转移和EMT1、生信分析结果显示子宫内膜癌组织中RHBDF2和YAP1蛋白表达水平呈正相关。2、Western blotting结果显示,敲减RHBDF2抑制YAP1表达,过表达RHBDF2促进YAP1表达。3、CCK8、克隆形成,划痕愈合、Transwell实验结果显示,YAP1通路抑制剂Ca3可部分回复过表达RHBDF2对细胞迁移和侵袭的促进作用;Western blotting实验结果显示,过表达RHBDF2促进子宫内膜癌细胞EMT标志物的表达变化,该结果被Ca3部分回复。三、RHBDF2通过上调Pkmyt1调控YAP1通路1、生信分析结果显示,RHBDF2与Pkmyt1蛋白表达水平显著正相关;Western blotting结果表明,敲减RHBDF2抑制Pkmyt1表达,过表达RHBDF2促进Pkmyt1表达。2、CCK8、细胞克隆、划痕愈合和Transwell实验的结果显示,敲减Pkmyt1抑制细胞增殖、迁移和侵袭,过表达Pkmyt1促进细胞迁移和侵袭。3、Western blotting结果显示,下调Pkmyt1后E-cadherin蛋白表达增加（P＜0.05）,N-cadherin、Snail1蛋白表达减低（P＜0.05）,即敲减Pkmyt1抑制细胞EMT;过表达Pkmyt1后E-cadherin蛋白表达减低（P＜0.05）,N-cadherin、Snail1蛋白表达增加（P＜0.05）,即过表达Pkmyt1促进细胞EMT。4、CCK8、克隆形成,划痕愈合、Transwell实验结果显示,下调Pkmyt1可部分回复过表达RHBDF2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。Western blotting结果显示,EMT标志物的表达变化也被下调Pkmyt1回复。同样,过表达Pkmyt1可部分回复下调RHBDF2对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。Western blotting结果显示,EMT标志物的表达变化也被过表达Pkmyt1回复。5、Western blotting实验结果显示,下调Pkmyt1可回复过表达RHBDF2上调YAP1表达水平。同样,过表达Pkmyt1可部分回复下调RHBDF2对YAP1信号通路的抑制作用。结论在细胞水平通过一正一反策略验证RHBDF2促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、转移和EMT的发生。可能的机制为:RHBDF2通过上调Pkmyt1表达后激活YAP1通路,促进子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT发生。这些发现可能有助于为子宫内膜癌的侵袭和转移提供新的实验基础和治疗靶点。