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动物乳腺生物反应器是一种专门用于生产重组蛋白的活体生物反应器,是转基因动物技术的一个分支。随着生物技术的发展,转基因技术逐步转向利用乳腺生物反应器获取大量有临床价值的药用蛋白。人白介素2是人体一种很重要的细胞生长因子,具有广泛的生物学活性,有很广阔的应用前景。本研究以克隆人白介素2以及构建山羊β-酪蛋白基因座定位整合载体为出发点,并利用脂质体将重组质粒转染奶山羊胎儿成纤维细胞,初步验证定位整合效率,从而为后续利用乳腺生物反应器生产人白介素2的深入研究奠定基础。试验结果如下:1.以人的外周血为实验材料,从人的全血中提取总RNA,利用RT-PCR技术,针对人白介素2基因的编码区,设计一对特异性引物,成功扩出467bp的目的片段,并克隆至T载体,在大肠杆菌E.coli DH5α中表达。2.以pBluskm为载体骨架,以奶山羊β-酪蛋白基因第一外显子的上游2.5Kb的调控序列为5’同源短臂,以第九外显子的下游的3.5Kb序列作为3’同源长臂利用克隆连接技术成功构建含有长度为2.5Kb的5’同源短臂、3.5Kb的3’同源长臂以及1.4Kb的青霉素抗性筛选标记基因的打靶载体。3.将白介素2的编码区连入打靶载体5’调控序列的下游,构建山羊β-酪蛋白基因座定位整合载体。4.以奶山羊40d龄的胎儿为试验材料,利用组织块法培养奶山羊胎儿成纤维细胞,经三次传代之后,成功获得呈良好的梭状的成纤维细胞,将细胞用于后续试验转染重组质粒。5.利用脂质体将构建的山羊β-酪蛋白基因座定位整合载体质粒转染胎儿成纤维细胞,经G418筛选阳性克隆并鉴定,成功获得含有目的基因的单克隆,可用于后续试验研究。