肾脏不同表型巨噬细胞浸润与狼疮性肾炎患者足细胞损伤关系的研究

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目的:观察狼疮性肾炎(LN)患者肾组织不同表型巨噬细胞的浸润情况并探讨其在LN患者足细胞损伤中的作用,为LN患者提供活动性及评估药物治疗反应性的无创性及可重复性指标。方法:选取2017年12月-2019年6月青岛大学附属医院肾病科及风湿免疫科门诊和病房收治的经肾活检确诊符合研究标准的60例LN患者和10例正常人。收集其相关临床资料和血清、尿液标本进行相关分析及实验。应用光镜观察LN患者肾脏病理变化,使用电子显微镜观察其肾脏足细胞等超微结构。采用免疫组织化学染色方法观察肾脏巨噬细胞(CD68+)的浸润情况,通过免疫荧光化学双重染色方法观察肾组织中巨噬细胞表型(M1:iNOS+/CD68+;M2:CD206+/CD68+)的变化和分布。免疫荧光化学染色法测定肾组织足细胞特异性蛋白Nephrin的表达情况。收集血清及尿液后采用间接免疫荧光化学染色方法测定尿足细胞数量,使用酶联免疫吸附法测定血清、尿液巨噬细胞相关免疫指标(IL-10、IL-12、TNF-α及OPN)和各项活动指标。结果:60例LN患者肾脏病理显示Ⅲ型LN12例、Ⅳ型LN18例、Ⅴ型LN 16例、Ⅴ+Ⅳ型LN组14例,其中活动组34例及非活动组26例(根据SLEDAI≥12分的标准定义为SLE疾病活动)[1]。LN患者肾组织足细胞特异性蛋白Nephrin的表达较正常对照组明显降低,且Ⅳ型LN比Ⅲ型、Ⅴ型及Ⅴ+Ⅳ型LN降低更加显著(P均<0.05)。LN肾组织巨噬细胞表现出异常激活和表型调控异常,巨噬细胞分型检测结果提示LN患者肾组织内巨噬细胞M1及M2浸润均增加且主要以M2型为主,且Ⅳ型LN患者巨噬细胞浸润情况比Ⅲ型、Ⅴ型及Ⅴ+Ⅳ型LN患者严重,其与LN患者临床指标、病理指标存在明显相关性,与LN患者肾脏病理活动指数呈正相关(P<0.05),与足细胞Nephrin蛋白表达情况呈负相关(P<0.05)。实验得出正常人尿中无足细胞脱落情况,而LN患者尿液中出现足细胞脱落且足细胞阳性率大约为85.2%。尿足细胞数量与24小时尿蛋白定量及疾病活动性呈正相关(P均<0.05),其与肾小球足细胞相关蛋白Nephrin的表达呈负相关(P<0.05)。实验结果提示足细胞特异性蛋白Nephrin与巨噬细胞(M1及M2)浸润和疾病病理活动指数及尿足细胞数量均呈负相关(P均<0.05)。LN血尿液中巨噬细胞相关免疫指标(IL-10、IL-12、TNF-α及OPN)较正常对照组均升高并且均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:LN患者肾脏不同表型巨噬细胞浸润可能与其足细胞损伤相关并可能与疾病病理活动情况相关。LN患者疾病发病过程中巨噬细胞的局部浸润与多种免疫因子相关,这可能是LN患者发病的潜在机制并且可能预测疾病的活动情况。
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