【摘 要】
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该研究从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用OligodT为逆转录引物逆转录合成cDNA第一链,然后分别采用针对V和V框架区的PCR引物扩增出V(重链可变区)和V(轻
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该研究从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用OligodT为逆转录引物逆转录合成cDNA第一链,然后分别采用针对V<,L>和V<,H>框架区的PCR引物扩增出V<,H>(重链可变区)和V<,L>(轻链可变区)DNA片段,其中在V<,L>的下游引物和V<,H>的上游引物含有部分人工连接子重叠互补序列,将V<,L>和V<,H>的PCR回收产物进行部分重叠PCR,PCR产物纯化后与PMD18-T克隆载体连接,连接子转化XL1-Blue感受大肠杆菌,通过特异性双酶切鉴定筛选阳性克隆,经DNA序列测定和分析证实,构建的单链抗体基因为V<,L>-(GGGGS)<,3>-V<,H>,基因长度约750bp.
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