【摘 要】
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该项研究根据人肺腺癌转移相关基因课题的研究结果,人肺腺癌转移相关基因RAB5A G81R反义RNA可引起细胞周期阻滞,为了进一步确认和深入探讨这一结果的可靠性及对细胞周期阻滞
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该项研究根据人肺腺癌转移相关基因课题的研究结果,人肺腺癌转移相关基因RAB5A G81R反义RNA可引起细胞周期阻滞,为了进一步确认和深入探讨这一结果的可靠性及对细胞周期阻滞的作用点,并比较分析野生型和突变型RAB5A反义RNA转染到Anip973细胞中,经Western Blot方法验证RAB5A蛋白表达受阻,用含0.2％FBS的RPMI1640培养基饥饿培养转染前后Anip973细胞,使三种细胞多达70％及以上的细胞同步于G<,0>-G<,1>期释放,流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比,发现突变型RAB5A G81R反义RNA转染的Anip973细胞出现G<,1>-S的明显阻滞.为进一步探讨突变型RAB5A G81R反义RNA延长G<,0>-G<,1>期的分子机制,我们进行了GEArray Q Series细胞周期特异微阵列杂交分析,结果发现,转染前后Anip973细胞中,E2F家族、抑癌基因p53和Cullin家族基因转录水平有明显差异.通过该项研究我们发现:血清饥饿法可有效地使Anip973细胞停滞于G<,0>-G<,1>期;突变型RAB5A G81R反义RNA可完全阻断Anip973细胞中RAB5A的表达;突变型RAB5A G81R反义RNA通过上调p53,E2F4和下调E2F4,E2F3,E2F6与Cul1,Cul2,Cul3而延长G<,0>-G<,1>期.
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