【摘 要】
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低温脂肪酶已成为工业低温工艺良好候选物,在食品、皮革、纺织、洗涤剂、生物柴油、化妆品、医药和废水处理等多个领域发挥重要作用。本论文从实验室所保藏的55株产低温脂肪酶酵母菌中筛选出一株高产菌株,对该菌株进行鉴定、优化产酶发酵条件,研究其酶学性质。本研究不仅为选育低温脂肪酶产生菌提供重要的理论价值,拓宽产低温脂肪酶酵母菌的菌株资源,同时对工业领域低温脂肪酶资源的开发利用及大规模生产提供重要的参考依据。
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低温脂肪酶已成为工业低温工艺良好候选物,在食品、皮革、纺织、洗涤剂、生物柴油、化妆品、医药和废水处理等多个领域发挥重要作用。本论文从实验室所保藏的55株产低温脂肪酶酵母菌中筛选出一株高产菌株,对该菌株进行鉴定、优化产酶发酵条件,研究其酶学性质。本研究不仅为选育低温脂肪酶产生菌提供重要的理论价值,拓宽产低温脂肪酶酵母菌的菌株资源,同时对工业领域低温脂肪酶资源的开发利用及大规模生产提供重要的参考依据。研究结果如下:1.菌株筛选。利用三丁酸甘油酯平板,筛选出12株透明圈与菌落直径比值较大的菌株。对上述菌株进行摇瓶复筛,获得一株脂肪酶高产菌株NYNU 19160,产酶活力达到34.47 U/m L。2.菌株鉴定。通过对菌株NYNU 19160的形态学、生理生化特征以及ITS和26S r DNA D1/D2区域序列进行分析,最终将其鉴定为Papiliotrema fonsecae。3.产酶发酵条件优化。通过单因素筛选,得出菌株NYNU 19160产低温脂肪酶最佳碳源为可溶性淀粉,最佳有机氮源和无机氮源分别为酵母粉和酒石酸铵,最佳无机盐为氯化钙,最佳诱导剂为大豆油,最佳表面活性剂为吐温20。在此基础上进行正交试验,得出最优发酵培养基组成为:可溶性淀粉31 g/L、酵母粉95 g/L、酒石酸铵8 g/L、氯化钙7.6 g/L、大豆油2.5 g/L和吐温20 4 g/L。优化发酵工艺后得出最佳条件:温度15℃、p H 7.0和发酵时间7天。在最优发酵条件下,该菌株产低温脂肪酶酶活力可达到（81.44±0.8）U/ml,比优化前提高了2.36倍。4.脂肪酶的纯化。根据硫酸铵沉淀上清液中脂肪酶活力变化曲线确定出分级沉淀饱和度,选用30%饱和度和90%饱和度分别进行硫酸铵一级沉淀和二级沉淀。酶液经过透析除盐、浓缩后得出纯化后酶液的纯化倍数为2.12,比活力为97.93 U/mg,活性回收率达到33.5%。5.酶学性质研究。该脂肪酶最适反应温度为20℃,在20～30℃条件下酶活力稳定性最好;酶最适反应p H为7.5,在p H 6.5～8.5范围内可保持最好的酶活稳定性;Cu2+显著促进了该酶水解活性,而Na2+、Li+、K2+对该酶表现为抑制作用;有机溶剂中乙腈、甲醇、乙酸对脂肪酶活性具有较强的促进作用,而苯和正己烷抑制了该酶活性;该脂肪酶对对硝基苯酚丁酸脂（p NPC4）底物表现出较强特异性。
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