化学农药对农业有害生物的防治虽然成效显著,但是由于日益恶化的环境问题,微生物农药的使用是大势所趋。苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）制剂是目前应用最为成功的一类微生物杀虫剂,在植物病害防治方面也取得了一定的进展。深入挖掘我国丰富的苏云金芽胞杆菌资源,分离克隆新型高毒力的杀虫蛋白基因,对构建高效广谱工程微生物和培育转基因抗虫植物具有重要的理论意义和应用价值。新秀丽小杆线虫（Caenorhabditis elegans）是蘑菇等真菌上的重要病原线虫,同时也是一种模式生物,能够在室内培养。本试验采用大肠埃希氏菌饲养,获得大量虫源,建立了以C.elegans为生物测定指标筛选高活力Bt菌株的技术路线,成功地筛选到高效活性菌株Bt 010。从Bt 010中克隆表达了两类Bt毒性因子:晶体蛋白和几丁质酶,采用质谱手段证实了几丁质酶的存在。该试验初步揭示了Bt侵染线虫的机制,丰富了Bt侵染线虫过程中的致病毒力因子几丁质酶的性质及其酶基因,为研究Bt侵染线虫的机制提供了有益的佐证。通过生物测定观察线虫对不同研菌株所产生的毒力反应,发现在118株Bt中只有6株对线虫有毒性,作用时间大约在36h左右,6株中Bt010最为理想,其LC₅₀为0.498μg/ml。Bt010伴孢晶体以菱形和方形为主,对其基因组进行PCR扩增,发现该菌株的基因组中存在cry 1Ⅰa,而未见预期含有的cry 5和cry 6等已知杀线虫的cry基因。根据cry 1Ⅰ基因保守序列设计简并引物,利用PCR技术扩增出杀虫晶体蛋白基因片段并在GenBank登录,登录号为EF065179。对该基因克隆表达结合生测发现该基因的表达产物对线虫不产生毒性作用。提取Bt010的总蛋白进行质谱分析,得到相似肽段推测其主要成分为几丁质酶。利用光学显微镜观察,Bt010处理线虫后,能不同程度地降低线虫的活动力,抑制线虫生长,明显破坏线虫体壁的完整性。透射电镜照片清楚表明Bt010能够有效降解体表层,引起线虫体壁结构的剧烈变化。基于以上结果,根据几丁质酶基因保守序列设计引物,利用PCR技术从Bt010中扩增到几丁质酶Chitinase基因,该基因已在GenBank中登录,登录号为EU030625。对该基因进行了克隆表达,生测发现该菌对线虫具有一定程度的毒杀作用。Bt010在杀灭线虫的过程中对线虫DNA不造成损伤,可以作为Bt安全性实验的辅证。除了对模式线虫Celegans有活性外,Bt010菌株对番茄根结线虫（Meloidogynespp.）也有一定的防效,证明该菌株具潜在的应用价值。本研究的特色和创新主要体现在以下三点:一.建立了以C.elegans生测为指标筛选高活力Bt菌株的技术路线;二.采用质谱手段证实了Chitinase在Bt中的存在;三.率先证实了Bt Chitinase对线虫的毒性作用。