林可霉素和它的衍生物是一类对革兰氏阳性菌有明显抑制作用的抗生素。本研究中我们建立并优化了大肠杆菌-林可链霉菌(S. lincolnensis)属间接合转移系统,利用温度敏感型穿梭质粒pKC1139,甲基化缺失的的E.coli ET12567作为供体菌,通过接合转移至S. lincolnensis中。以pJTU2554为载体,构建了能覆盖S. lincolnensis所有基因的全基因组文库,并通过基于PCR筛选的方法得到了能包含林可霉素整个生物合成基因簇的黏粒1E8。林可霉素的生物合成基因簇存在于大约35kb染色体区域上,包含27个推定的生物合成及调控基因(lmb基因)和3个抗性基因(lmr基因)。我们利用同框敲除的策略,对3个推定的调控基因lmbIH, lmbQ和lmbU进行中断。摇瓶发酵结果显示所有的突变株产林可霉素能力均大幅下降,表明这三个基因可能都是正调控基因。将3个推定的甲基化酶基因lmbM1、lmbM2和lmbM3进行了同框敲除。对lmbM1基因中断突变株发酵的中间产物进行分离纯化并通过核磁共振鉴定结构,确定是林可霉素B,这为lmbM1基因功能的推断提供了十分重要的证据。lmbM3中断突变株产生的中间产物进行了初步分离。lmbM2基因中断突变株失去林可霉素产生能力,表明该基因与林可霉素生物合成直接相关。