目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作为一种高发病率、高致死率的全球性恶性肿瘤,其进展速度快、转移率高、复发率高、不易早期诊断,导致肝细胞癌病人治疗后5年生存率常不足5%,严重威胁着人类的生存健康。引起肝细胞癌病因很多,目前在我国,肝细胞癌主要由慢性乙型肝炎继发的肝硬化引起。microRNA(miRNAs,即微小RNA)是一类短的、非编码RNA,通过与靶基因m RNA特异序列的互补性结合在转录后水平调节靶基因的表达。近年来有研究表明,在肝细胞癌发生发展的过程中,许多miRNA的表达都发生了明显的改变。在本实验室的前期工作中,对HBV阳性的肝癌组织进行Solexa测序,发现了一个新的、在HBV阳性肝癌组织中高表达的miRNA——novel-miR-13。本文通过研究novel-miR-13对肝癌细胞恶性行为的影响,拟阐明novel-miR-13在HBV病毒相关的肝癌发生发展的中发挥的作用及相关分子机制。方法首先应用qRT-PCR方法检测novel-miR-13在HBV阳性肝癌细胞中的表达水平,以验证本实验室前期Solexa测序结果的正确性。随后在两种人类肝癌细胞系Huh7和Hep G2细胞中,过表达novel-miR-13后,利用MTT实验、平板克隆形成实验、transwell迁移、侵袭实验检测novel-miR-13对癌细胞活性、生长增殖能力、迁移和侵袭能力的影响。之后利用生物信息学方法预测novel-miR-13的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验结合qRT-PCR和western blot实验验证novel-miR-13对其靶基因NFIX的直接调控作用。接着,过表达和敲降靶基因NFIX,通过细胞表型实验研究靶基因NFIX的功能。最后,通过一系列细胞表型的挽救实验证实novel-miR-13在肝癌中发挥作用是否通过NFIX实现的。结果Novel-miR-13在HBV阳性肝癌细胞中水平明显增高,过表达novel-miR-13明显增加肝癌细胞的活性、集落形成能力、迁移和侵袭能力。生物信息学预测靶基因NFIX为novel-miR-13的候选靶基因,其3’UTR包含novel-miR-13的潜在结合位点。荧光报告载体实验证实,novel-miR-13能够与靶基因3’UTR的特定位点结合,并对其表达进行负性调控。在过表达novel-miR-13的肝癌细胞中,靶基因的m RNA和蛋白表达水平与对照组相比都明显降低。在肝癌细胞中过表达靶基因后,细胞活性、增殖、迁移和侵袭能力降低,并且由挽救novel-miR-13引起的一系列细胞表型的变化。相反,在肝癌细胞中敲降靶基因NFIX后,细胞的活性、增殖、迁移和侵袭能力升高。结论在HBV相关的肝癌细胞中,HBV能够诱导novel-miR-13表达升高;过表达novel-miR-13可以促进细胞活性、集落形成能力、转移和侵袭能力,封闭novel-miR-13可以抑制细胞活性、集落形成能力、转移和侵袭能力。Novel-miR-13可以通过下调NFIX的表达,降低NFIX的抑癌作用,最终使肝癌细胞活性、增殖、迁移和侵袭能力增加,起到癌基因的作用。