【摘 要】
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羊肚菌(Morehella),属于盘菌目(Pezizales),羊肚菌科(Morchellaceae),是一种食药兼备的珍稀食用菌,也是目前唯一可以大面积栽培的土生类食用菌。在我国四川、云南、陕西、湖南、湖北等地已实现羊肚菌大规模栽培,但是在黄河三角洲地区,由于缺少耐盐羊肚菌菌株,而今还未实现规模化栽培。本研究以筛选耐盐羊肚菌菌株及其盐胁迫下的生理响应为目标,首先对收集到的48株羊肚菌菌株种质资源
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羊肚菌(Morehella),属于盘菌目(Pezizales),羊肚菌科(Morchellaceae),是一种食药兼备的珍稀食用菌,也是目前唯一可以大面积栽培的土生类食用菌。在我国四川、云南、陕西、湖南、湖北等地已实现羊肚菌大规模栽培,但是在黄河三角洲地区,由于缺少耐盐羊肚菌菌株,而今还未实现规模化栽培。本研究以筛选耐盐羊肚菌菌株及其盐胁迫下的生理响应为目标,首先对收集到的48株羊肚菌菌株种质资源进行鉴定,其次通过设置对照组和高盐浓度实验组,观测不同羊肚菌菌株的菌丝在对照组和实验组生长过程中产生的症状。计算耐盐系数、指标权重、隶属函数值和综合评价值,根据耐盐综合评价值,选取耐盐性最强的菌株,对其在盐胁迫下的菌丝形态、菌丝细胞膜系统、渗透系统以及抗氧化酶系统等生理指标进行测定,采用相关性分析和主成分分析,确定不同盐浓度处理下的耐盐羊肚菌菌株的指示性指标。进一步通过在不同盐浓度的培养基中定量添加外源KCl和Ca Cl2,测定菌丝中Na+、K+和Ca2+含量,从而确定盐胁迫下羊肚菌菌丝中的离子流向,为羊肚菌耐盐种质筛选和羊肚菌耐盐品种选育提供了方法和理论依据。具体实验结论如下:1.通过交配型基因检测,本研究收集的48个菌株中具有双交配型基因的菌株有24株。通过多基因联合建树以及ISSR遗传多样性分析,可将供试菌株分为三大支群,说明供试材料具有丰富的种质资源多样性。其中,36和45号菌株的亲缘关系最近。2.通过耐盐性评价的结果可以看出,从24株羊肚菌菌丝的生长速度、菌丝的外观形态、萌发时间以及生物量进行综合评价,结果表明:21号菌株耐盐性最强,耐盐综合评价值高达0.95;35和45号菌株为盐敏感型菌株,耐盐综合评价值均为0。3.通过盐胁迫对21号六妹羊肚菌菌丝生理响应的研究发现:随着盐胁迫加深,六妹羊肚菌菌丝生长速度和菌丝直径均呈下降趋势,生物量也呈下降趋势,而菌丝鲜重含水量呈先上升后下降的趋势。盐胁迫对六妹羊肚菌菌丝膜透性的影响主要表现为膜透性逐渐增大,而丙二醛含量呈现先上升后下降的趋势,在200mmol/L盐浓度时,达到最大值。盐胁迫对六妹羊肚菌菌丝渗透性的影响主要表现在液体培养基中添加Na Cl后,菌丝细胞内渗透压明显增加,胞外多糖含量逐渐上升,胞内多糖含量逐渐下降;盐胁迫对可溶性蛋白含量影响不大,而游离脯氨酸含量呈先上升后下降趋势,盐浓度为300 mmol/L时,达到最大值。盐胁迫对六妹羊肚菌菌丝渗透性的影响主要表现为同一时间内,随着盐浓度的增加,六妹羊肚菌菌丝中超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性以及过氧化氢酶(CAT)活性均呈现先上升后下降的趋势,分别在300 mmol/L、200 mmol/L、200 mmol/L达到最高活性。在离子稳态方面,随着Na Cl添加量的增多,菌丝中Na+含量呈逐渐上升趋势,K+含量呈逐渐下降趋势,而Ca2+含量呈先上升后下降趋势,菌丝细胞内的离子平衡被打破。结论:根据相关性分析和主成分分析共提取3个主成分,累计贡献率为96.61%。其中,在低Na Cl浓度(0-100 mmol/L)时,指示性生理指标为生长速度、菌丝直径、干重、鲜重和胞内多糖;在中等Na Cl浓度(100 mmol/L-200 mmol/L)时,指示性生理指标为丙二醛、可溶性蛋白、SOD活性、POD活性和CAT活性;在高Na Cl浓度(200-400 mmol/L)时,指示性生理指标为脯氨酸、可溶性蛋白和SOD活性。
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