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近年来研究表明，胱抑素C(cystatin C，Cys C)在评价肾脏疾病、肾移植、糖尿病、肝硬化等疾病患者的肾功能损害中比血肌酐更敏感和可靠，它可以作为新的肾功能评价的指标，但目前检测Cys C的试剂盒价格都比较高，妨碍了它在临床检测中的应用。 本实验研究在大肠杆菌中表达重组人Cys C重链单域抗体(variable domain of theheavy chain of heavy-chain antibody，VHH)并对表达条件进行优化，经纯化和复性后，建立测定人血清Cys C的胶乳增强免疫比浊法(Particle enhanced turbidimetricimmunoassay,PETIA)。 根据大肠杆菌编码蛋白的特性设计Cys C重链单域抗体编码基因序列，人工合成目的基因克隆到PET32a(+)载体上，构建人Cys C重链单域抗体原核表达质粒PET32a(+)-Cys C VHH，测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，通过正交试验设计对表达条件进行优化，确定了重组人Cys C重链单域抗体蛋白最优的表达条件:诱导温度为37℃、诱导时间为8h、诱导剂IPTG浓度为0.6mmol/L。然后在最优条件下进行大量表达，将所获得的目的蛋白经Ni-NTA亲和层析法进行纯化，SDS-PAGE电泳分析显示，表达的Cys C重链单域抗体蛋白相对分子质量约为53kD，经Ni-NTA亲和层析法纯化后纯度达90％以上。通过稀释复性，复性回收率为60％左右。Cys C重链单域抗体化学偶联胶乳颗粒，建立PETIA法并进行初步优化，利用建立的PETIA法测定10例健康人和5例病人血清Cys C，能检测到健康人和病人血清中的Cys C含量并且两者存在显著性差异。 本实验成功构建Cys C重链单域抗体原核表达系统并获得了有活性的Cys C重链单域抗体，该抗体可用于建立测定人血清Cys C的PETIA法，为下一步开发Cys C的免疫检测试剂盒奠定了基础。