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研究背景和目的： Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock2）属于Rho家族的下游效应蛋白，在肿瘤的发生发展中起着重要作用。基质金属蛋白酶2（MMP2）是主要参与调节肿瘤细胞侵袭转移的一种金属蛋白酶。本研究主要探讨原发性肝癌组织及肝癌细胞中Rock2和MMP2表达及其关联情况，并研究Rock2在MMP2介导的肝癌侵袭和转移中的作用及其具体作用机制。 方法： 1、采集77例患有原发性肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁组织，通过运用qRT-PCR、Western Blot等方法检测肝癌组织及癌旁组织Rock2和MMP2蛋白的表达水平，并通过统计分析两者的相关性。 2、通过荧光定量和Western Blot检测肝癌细胞HCCLM3、MHCC97H、SMCC7721、HepG2、Huh-7及正常肝细胞HL7702中Rock2和MMP2的mRNA和蛋白表达情况。我们构建了4个shRock2干扰质粒，并将我们构建的4个干扰质粒转染至肝癌细胞，利用荧光定量PCR和Western Blot检测转染48h后Rock2蛋白和mRNA的表达变化；将筛选出的最佳shRock2干扰质粒和Rock2特异性抑制剂(Y27632)转染到人肝细胞癌HepG2和HCCLM3中，通过运用荧光定量PCR和Western Blot检测转染48h后细胞中Rock2、MMP2 mRNA和蛋白表达变化；并且运用transwell实验和划痕实验观察干扰Rock2和加入Rock2特异性抑制剂(Y27632)处理后肝癌细胞侵袭迁移能力的变化；利用稳定转染肝癌细胞株建立人肝癌裸鼠皮下瘤模型，观察荷瘤裸鼠肿瘤内Rock2和MMP2蛋白表达情况及荷瘤裸鼠出现肝内转移、远处肺转移情况； 3、通过Western Blot、免疫共沉淀、激光共聚焦确定MMP2和Ub的相互作用及Rock2通过调节MMP2的泛素化及其降解促进原发性肝癌细胞的侵袭转移的机制研究。 结果： 1、实时定量PCR结果显示，在肝癌组织中Rock2和MMP2 mRNA表达显著高于癌旁组织，Western Blot分析结果表明，77.92％（60／77）的患者肝癌组织中Rock2蛋白表达明显高于癌旁组织，62.34%（48／77）的患者肝癌组织中MMP2蛋白也明显高于癌旁组织。而且，通过散点图分析发现Rock2和MMP2 mRNA和蛋白表达水平呈显著正相关。另外，通过Western Blot和RT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和五株不同肝癌细胞株中Rock2和MMP2的表达情况，结果发现所有肝癌细胞株中Rock2和MMP2的mRNA和蛋白表达均明显比正常的肝细胞升高，且其表达趋势较一致。 2、稳定转染Rock2最佳干扰shRNA至HepG2和HCCLM3肝癌细胞系，发现Rock2蛋白的表达明显下降（p<0.05），同时发现MMP2基因蛋白表达也随之下降（p<0.05）；Transwell实验及划痕实验结果显示降低Rock2表达后，HepG2和HCCLM3细胞侵袭迁移能力明显减弱（P<0.05），过表达MMP2则可以反转干扰Rock2导致的侵袭迁移能力下降；利用人肝癌裸鼠皮下肿瘤模型发现干扰Rock2蛋白表达能减少裸鼠体内肝癌细胞的肝内转移及远处肺转移（p<0.05）。3、通过免疫共沉淀和激光共聚焦等实验证实MMP2是通过泛素化降解。同时，证实Rock2通过调节MMP2的泛素化及其降解稳定MMP2的表达来影响肝癌的侵袭和转移。 结论： Rock2能促进肝癌侵袭转移，其机制是通过干扰MMP2的泛素化降解。为MMP2的控制确定了一种新途径，可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶点。