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神经生长因子对体外培养腺样囊性癌细胞增殖的作用 本研究首先探讨使用无血清培养基培养腺样囊性癌细胞的可能性,在此基础上使用MTT(噻唑蓝)法研究外源性神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对体外培养的腺样囊性癌低转移细胞株Acc-2和肺高转移株Acc-M增殖的作用,并使用RT-PCR检测两株细胞系NGF的受体TrkA和p75在mRNA水平的表达,以探讨NGF在腺样囊性癌发生、发展中的作用。结果显示无血清培养基用于腺样囊性癌细胞的短期培养是可行的。在体外培养的条件下,两株细胞系在mRNA水平不表达NGF的受体,NGF对两株细胞的增殖不表现出促进或者抑制的作用。 第一部分 无血清培养腺样囊性癌细胞的实验观察 目的:观察腺样囊性癌细胞系Acc-2在无血清培养基内的生长,为体外实施细胞的干预提供实验依据。 方法:分别使用含ITS添加剂的RPMI1640无血清培养基以及含10%小牛血清的RPMI1640培养基培养Acc-2细胞。使用相差显微镜观察细胞形态。在绘制细胞生长曲线时使用3种培养方法:1.含血清培养基接种并培养;2.无血清培养基接种并培养;3.含血清培养基接种24h后无血清培养基培养。检测使用两种培养基接种时细胞克隆形成能力,以及以10~4/cm~2的密度在两种培养基内接种时24h细胞贴壁率。最后使用流式细胞仪检测两种培养基内生长的Acc-2细胞对数生长期内的周期分布。 结果:从生长曲线上可以看出三种培养方法下对数生长期细胞生长速度较一致,但是使用无血清培养基接种并培养24h时细胞的数量有所减少,而使用血清培养基接种24h后更换为无血清培养基培养时,细胞数量没有减少,并在接种48h时已进入对数生长期。细胞使用无血清培养基培养时,Acc-2细胞贴壁能力减弱,24h贴壁率仅为(28.4±2.9)%,伸展不够充分,单个细胞克隆形成能力丧失;含血