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研究目的：建立套式逆转录聚合酶链反应(nested reverse transcription-polymerase chain reaction，nested RT-PCR)检测临床样本鼻病毒(human rhinovirus，HRV)基因的方法，并进一步对扩增产物进行序列分析；用套式RT-PCR及直接免疫荧光(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法对包括HRV在内的引起小儿急性下呼吸道感染(acute low respiratory tract infection，ALRTI)的常见病毒病原进行检测，以了解上海地区ALRTI患儿病毒感染的现状。对象及方法：1．收集2005年1月到2005年12月住院确诊为共342例ALRTI患儿的深部鼻咽分泌物(nasopharyngeal secretion，NPS)标本。2．用套式RT-PCR的方法检测NPS中的HRV基因，并进一步对扩增产物进行序列分析；用直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法检测NPS中的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、流感病毒(influenza virus，IFV)、副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)、腺病毒抗原(adenovirus，ADV)。3．对各种病毒在小儿ALRTI中所占比例、性别、年龄、季节分布及临床特点进行分析。结果：1．用套式RT-PCR的方法在342例ALRTI患儿的NPS标本中，检测到46例HRV为阳性(13.45％)；选取15份HRV阳性样本用另一对引物扩增并测序，测得的核苷酸序列经过blast比较，与GeneBank中已知HRV序列的同源性在83％～97％之间；15份样本序列之间核苷酸同源性在64.4％到98.4％之间，核苷酸变异在1.6％到48.3％之间；15份样本序列在进化树中聚类为2簇；15份样本序列变异度较大，可表现为核苷酸的点突变，也可是临近几个碱基同时突变，甚至有单个或临近几个碱基的核苷酸缺失及插入突变。2．男性223例患儿中检测出HRV阳性33例(14.7％)，女性119例患儿检出HRV阳性13例(10.9％)男女阳性数之比为2.5：1，但男女检出率无差异(X~2=1，P＞0.05)。HRV阳性患儿中，3岁以下婴幼儿检出例数有38例，占HRV总检出数的82.6％；1岁以下患儿检出27例占HRV总检出数的58.7％。HRV致ALRTI全年可见，在3到5月为最高峰。3．342例患儿中检出RSV阳性64例(18.70％)。男性223例患儿中检出RSV阳性46例(20.6％)，女性119例患儿中RSV阳性18例(15.1％)，男女阳性数之比为2.6：1，但男女检出率无差异(X~2=2.41，P＞0.05)。RSV阳性患儿中，1岁以下婴幼儿检出例数有46例，占RSV总检出数的71.8％。1岁以下患儿RSV的检出率(47.90％)与1岁以上患儿RSV的检出率(12.30％)比有显著差异(X~2=4.03，P＜0.05)。RSV的检出阳性率从2月份起逐渐下降至6到7月份达到最低；8月份起检出率逐渐升高，到12月份达到最高。4．342例ALRTI患儿中检出ADV感染9例(2.63％)；342例中检出PIV感染8例(2.3％)，其中1型PIV7例，2型PIV1例；342例中检出IFV感染7例(2.0％)，其中A型IFV5例，B型IFV2例。5．本组患儿病毒混合感染共有4例：RSV合并HRV感染1例，RSV合并ADV感染1例，RSV合并1型PIV感染1例，HRV合并A型IFV1例。6．342例患儿总共检出病毒阳性的病例130例，总检出率为38％。男女感染数之比为2.8：1。男性感染率(43％)比女性感染率(28.60％)较高(X~2=6.9，P＜0.01)。1岁以下患儿的病毒感染阳性数为88例，占总阳性数的67.7％。六岁以上患儿的病毒检出率(8.3％)较小于六岁组(40.3％)明显下降(X~2=9.6，P＜0.01)。本组患儿的病毒检出率有明显的季节变化，1～3月、4～6月、7～9月及10～12月的检出率分别为37.20％、30.10％、32.30％及53.40％。其中10～12月份的检出率(53.40％)与1～9月份平均检出率(33.8％)相比有显著差异(X~2=9.35，P＜0.01)。结论：1．套式RT-PCR检测用于HRV基因诊断具有快速、操作简便及特异性较强的特点，可应用于临床检测，HRV基因组具有高度变异的特点。2．病毒病原在本地区小儿ALRTI中占有重要地位。小儿病毒性ALRTI以6岁以下患儿为常见，男孩偏多，尤以1岁以下年龄组多见。病毒性ALRTI有明显的季节分布，本地区以第四季度为最高。3．本地区小儿病毒性ALRTI中，以RSV及HRV占为主要地位，ADV、PIV及IFV相对少见。少见混合性病毒感染。4．HRV所致小儿ALRTI以3岁以下儿章多见，尤以1岁以下为多。在本地区，HRV感染主要集中于春秋两季。5．RSV所致小儿ALRTI以1岁以下年龄段为主。季节以秋、冬、春三季气温较低的时节多发。