【摘 要】
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目的:该研究通过抑制Kalirin的表达,观察p-21活化激酶1（p21-activatedkinase1,PAK1）在大鼠脑缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）损伤后的表达水平变化情况、大鼠神经功能缺损程度的差异、脑梗死体积比的对比以及脑缺血半暗带区的脑组织形态学的病理变化,来阐述Kalirin大鼠IR损伤及PAK1表达水平的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常组、空载
【基金项目】
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国家自然科学基金（81760225）；
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目的:该研究通过抑制Kalirin的表达,观察p-21活化激酶1（p21-activatedkinase1,PAK1）在大鼠脑缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）损伤后的表达水平变化情况、大鼠神经功能缺损程度的差异、脑梗死体积比的对比以及脑缺血半暗带区的脑组织形态学的病理变化,来阐述Kalirin大鼠IR损伤及PAK1表达水平的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常组、空载慢病毒组、慢病毒A组、慢病毒B组、慢病毒C组。通过立体定位,于大鼠右侧侧脑室分别注射空病毒及3条慢病毒（A、B、C）。通过蛋白印迹实验（western-boltting,WB）检测各组Kalirin表达变化情况,从而筛选出抑制效果最佳的慢病毒。将雄性SD大鼠随机分为正常组、MCAO组、MCAO+空载慢病毒组（MCAO+LV-Scramble）、MCAO+慢病毒组（MCAO+LV-Kalirin）。用大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）法建立大鼠脑缺血再灌注模型。通过Zea-Longa评分、平衡木实验评估各组大鼠IR损伤后神经功能缺损程度及大鼠行为学改变情况,氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazol-iumchloride,TTC）染色测定各组大鼠脑梗死体积,苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色观察IR损伤后的脑组织病理形态改变,WB检测PAK1在各组中的表达情况。结果:1、Zea-Longa评分结果:正常组、MCAO组、MCAO+LV-Scramble组、MCAO+LV-Kalirin组Zea-Longa评分分别为（0分）（2.20±0.4分）、（2.40±0.55分）、（3.00±0.71分）;结果显示各IR模型组（MCAO组、MCAO+LV-Scramble组、MCAO+LV-Kalirin）Zea-Longa评分较正常组相比,均有升高,提示各IR组存在神经功能缺损,其中MCAO+LV-Kalirin组Zea-Longa评分与MCAO组、MCAO+LV-Scramble组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;而MCAO组与MCAO+LV-Scramble组相比,无统计学意义（P>0.05）。2、平衡木实验结果:正常组、MCAO组、MCAO+LV-Scramble组、MCAO+LV-Kalirin组平衡木评分分别为（1.00±0.00分）、（4.40±0.55分）、（4.20±0.45分）、（5.20±0.84分）。结果显示各IR模型组平衡木实验评分较正常组相比,均有升高,提示各IR组存在行为学改变,其中MCAO+LV-Kalirin组平衡木评分与MCAO组、MCAO+LV-Scramble组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;MCAO组与MCAO+LV-Scramble组相比,无统计学意义（P>0.05）。3、TTC染色结果:正常组、MCAO组、MCAO+LV-Scramble组、MCAO+LV-Kalirin组脑梗死体积百分比分别为（0.00±0.00）、（24.22±6.15）、（24.97±12.03）、（44.07±0.51）。各IR模型组中均有不同体积梗死灶形成,而正常组中未见梗死灶,其中MCAO+LV-Kalirin组的脑梗死体积百分比与MCAO组、MCAO+LV-Scramble组比较明显增大,差异具有统计学意义（P<0.05）。MCAO组脑梗死体积百分比与MCAO+LV-Scramble组相比无统计学意义（P>0.05）。4、HE染色结果:正常组大鼠脑组织结构清晰,神经元胞浆饱满,细胞核居中、大小相近,与周围细胞间隙致密,未见明显病理学形态改变。各IR模型组可经元数量较正常组减少,细胞核固缩、大小不一,且细胞周围可见空泡增多。5、WB结果:在各组中,PAK1均有基础表达。其中MCAO组、MCAO+LV-Scramble组PAK1表达水平显著增加,且与正常组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。而在MCAO+LV-Kalirin组中PAK1表达水平明显下降,与MCAO+LV-Scramble组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。MCAO组与MCAO+LV-Scramble组相比,无统计学意义（P>0.05）。结论:在IR损伤后,PAK1在MCAO+LV-Kalirin组中表达水平的与MCAO组、MCAO+LV-Scramble组相比明显下降,且MCAO+LV-Kalirin组大鼠与MCAO组、MCAO+LV-Scramble组相比神经功能受损程度较重、行为学改变明显及脑梗死体积明显增大,提示可能存在Kalirin对PAK1的调控作用,及参与IR损伤后的神经保护机制。
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