耐异烟肼结核杆菌快速诊断抗原的筛选和鉴定

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在进行结核杆菌比较蛋白质组学分析时,发现多数菌株与结核杆菌标准参考株H37Rv相比都有一个蛋白不表达,经质谱鉴定这一蛋白为Rv0927c。推测这一蛋白的不表达可能与结核杆菌的某一基因型别相关,为证实这一观点本研究选取56株结核杆菌临床分离株,采用双向电泳、基因序列分析、Spoligotyping等方法对各分离株该基因的表达情况及菌株的基因型别进行分析。结果在检测的56株临床分离株中,有49株耐药性各异的分离株在Rv0927c基因序列的第141位出现丝氨酸密码子的缺失,该基因上游-127位有一个点突变(G→A)存在,且在双向电泳和Western blot分析中均未见这一蛋白表达;其余7株分离株该基因的基因序列与H37Rv一致。由Spoligotyping结果可知,存在丝氨酸密码子缺失的49株结核杆菌均属于北京基因型,其余在该基因位点上无突变的7株均属于非北京基因型。表明Rv0927c基因丝氨酸密码子的缺失与否与结核杆菌的北京基因型别相关。因此,检测Rv0927c的14l位密码子的缺失与否或检测这一基因的表达与否可能可以作为结核杆菌北京基因型分型的一个标志。 除此而外,本文还对结核杆菌耐药与药物外排泵的关系进行了初步探讨。为明确药物外排泵基因在药物压力下是否过表达,本文通过应用real-time RT-PCR的方法对在异烟肼和利福平药物压力下耐多药菌株中5个药物外排基因Rv0783c,Rvl258c,Rvl410c,Rvl819c,Rv2136c表达水平进行分析,以确定这些外排基因在药物压力下其mRNA的表达水平。结果Rvl258c和Rvl410c基因在异烟肼和利福平压力下转录水平有显著增高(P<0.05)。Rvl819c基因在异烟肼压力下转录水平有显著增高(P<0.05)。表明结核杆菌耐药与一些药物外排基因的过表达有明显的相关性。
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